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作者:方媚;许文芳;王娇娇;吴筱丹;金法祥;李士敏;
单位:浙江大学农生环测试中心;绍兴文理学院附属医院检验科;泽达精准(杭州)生物科技有限公司;
摘要:建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定人血清中结核病(TB)生物标志物培养滤液蛋白10(CFP-10)的方法。血清样品经蛋白沉淀、胰蛋白酶消化后,采用固相萃取(SPE)富集纯化CFP-10酶解产生的特异性肽段,经Luna Omega PS-C18色谱柱分离后,采用电喷雾电离源正离子模式(ESI+),多反应监测(MRM)模式检测。结果表明:方法在3~100 ng/mL范围内线性良好,线性相关系数r2=0.9906,方法检出限和定量限分别为1.0和3.0 ng/mL,加标回收率为89.8%~108.1%,日内和日间的相对标准偏差均低于10%。采用该方法对61个实际血清样品进行测定,结果显示结核病例组的血清CFP-10水平较非结核病对照组显著升高。该方法可实现高通量处理,适用于临床血清样本中CFP-10的检测。
关键词:培养滤液蛋白10;;超高效液相色谱-串联质谱法;;结核病;;血清
基金资助:浙江省教育厅科研项目(Y202043226)资助