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作者：王雪;曹小青;郭冬梅;徐福荣;马晓惠;
单位：云南中医药大学/云南省教育厅民族药物质基准研究重点实验室;云南中医药大学中药学院/云南省南药可持续利用研究重点实验室;
摘要：目的：克隆并分析黄草乌乙酰辅酶A酰基转移酶(AACT)基因，以便解析黄草乌中二萜生物碱的合成调控机制。方法：基于黄草乌转录组数据筛选并克隆AvAACT基因；应用相关软件对其进行生物信息学分析；在大肠杆菌中表达该基因的编码蛋白，并利用实时荧光定量PCR检测AvAACT基因在植物体各组织及MeJA诱导后的表达情况。结果：从黄草乌中克隆获得2条AvAACT基因，AvAACT1和AvAACT2的开放阅读框分别为1 215 bp和1 206 bp,分别编码404个和401个氨基酸。生物信息学分析显示，该氨基酸序列与唐松草等植物中的AACT有较高的同源性，都具有Ⅱ型硫解酶催化作用的活性中心结构域。在大肠杆菌中成功表达了AvAACTs重组蛋白。qRT-PCR分析结果表明，AvAACTs基因在黄草乌根、茎、叶和花中均有表达，AvAACT1在花中表达量最高，AvAACT2在叶中表达量最高；经MeJA诱导后，黄草乌AvAACTs的表达量均明显上调。结论：该研究从黄草乌中克隆出AvAACTs基因的全长序列，并在大肠杆菌中成功表达其重组蛋白，同时明确了黄草乌不同组织以及经MeJA处理不同时间后该基因的表达模式，为进一步挖掘AvAACTs基因的功能积累了坚实的基础。
关键词：黄草乌;;乙酰辅酶A酰基转移酶;;基因克隆;;实时荧光定量-聚合酶链式反应;;原核表达
基金资助：云南省应用基础中医联合专项项目(202101AZ070001-053);; 云南省王源超专家工作站(202305AF150018);; 中央本级重大增减支项目(2060302);; 云南省科技人才和平台计划项目(202105AG070012)
