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作者：马尧丹;俞晖;陈海恩;杨阳开心;葛书君;吴江;康恺;
单位：广东海洋大学滨海农业学院;
摘要：为探究猪瘟病毒（CSFV）感染对猪睾丸支持细胞（ST）mRNA表达谱的影响，本试验以感染CSFV 24和48 h的ST细胞和未感染ST细胞为模型，通过蛋白免疫印迹试验（WB）和间接免疫荧光（IIF）染色检测CSFV E2蛋白的表达；构建4个cDNA文库进行转录组测序，对差异表达基因（DEGs）进行基因本体论（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书数据库（KEGG）富集分析并筛选血睾屏障相关DEGs，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）、WB和IIF对DEGs进行验证。结果显示，CSFV感染24和48 h后，ST细胞均表达了E2蛋白；与Control 24 h相比，CSFV 24 h的ST细胞共鉴定出86个显著差异DEGs(P <0.05)；与Control 48 h相比，CSFV 48 h的ST细胞共鉴定出1 481个显著差异DEGs(P <0.05)。DEGs极显著富集在27个GO功能条目上，主要包括生物学过程、细胞组分和分子功能（P <0.01）；极显著富集的KEGG信号通路主要包括肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、晚期糖基化终产物受体（AGE-RAGE）信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等（P <0.01）。DEGs的qPCR验证结果显示，与Control 24 h相比，CSFV 24 h的CLDN11、H2AFX和CDH2表达量极其或极显著上调（P<0.001或P <0.01）,TJP1、OCLN和GJA1表达量显著下调（P <0.05）；与Control48 h相比，CSFV 48 h的FASLG、TGFB1、IL-6和H2AFX表达量极其或极显著上调（P <0.001或P <0.01）,TJP1、OCLN、GJA1、CLDN11和CDH2表达量极显著下调（P <0.01）。差异表达蛋白WB验证结果显示，与Control 24 h相比，CSFV 24 h的TJP1、CLDN11和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调（P <0.001或P <0.01）,CLDN11蛋白表达量极其显著上调（P <0.001）；与Control 48 h相比，CSFV 48 h的TJP1、CLDN11、OCLN和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调（P <0.001或P <0.01）。IIF结果显示，与Control 48 h相比，CSFV 48 h的TJP1蛋白相对荧光面积极显著下调（P <0.01）,CLDN11、OCLN和GJA1蛋白相对荧光面积显著下调（P <0.05）。以上验证结果与转录组测序结果基本一致。结果表明，CSFV感染24和48 h均会影响ST细胞屏障功能相关基因的表达，本试验为进一步探究CSFV对ST细胞屏障的影响机制提供了数据支持。
关键词：猪瘟病毒(CSFV);;猪睾丸支持细胞;;mRNA差异表达;;基因本体论(GO)功能注释;;京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析
基金资助：广东省自然科学基金（2020A1515110362）;; 广东省科技厅海外名师项目（K23438）;; 湛江市科学技术局海洋生物方向基金（2021E05028）
