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作者：刘玲;戴伶俐;李晓艳;付玲芳;康斌;董鹏;武玉梅;尹忠良;吴蒙;李雪峰;
单位：金河佑本生物制品有限公司;内蒙古自治区农牧业科学院;呼和浩特市动物疫病预防控制中心;包头九原区畜牧水产服务中心;呼和浩特佑本疫苗科技有限公司;
摘要：为实现对口蹄疫病毒（FMDV）类病毒颗粒（VLPs）疫苗免疫效果的有效评估，建立一种O型FMDV VLPs疫苗抗体竞争酶联免疫吸附测定（ELISA）检测方法。本试验以O型FMDV VLPs作为免疫原免疫小鼠制备单克隆抗体，通过O型FMDV VLPs和O型FMDV灭活疫苗抗原筛选，ELISA四参数拟合曲线判定，确定最佳单抗。将O型FMDV VLPs作为包被抗原，辣根过氧化物酶（HRP）标记特异性单抗与被检血清竞争结合，通过优化确定O型FMDV VLPs最佳包被浓度、HRP标记特异性单抗最佳工作浓度和最适封闭液，经计算确定判定标准，并进一步分析该竞争ELISA方法的敏感性和特异性；采用建立的方法检测90份O型FMDV VLPs疫苗免疫猪血清样品，验证其实用性。结果显示，O型FMDV VLPs特异性单抗为1D3单抗，该竞争ELISA检测方法的最佳工作条件为：O型FMDV VLPs最佳包被浓度为0.2μg/mL,HRP标记1D3单抗最佳工作浓度为1∶1 000，最适封闭液为1%明胶。竞争ELISA判定标准为：被检血清阻断率≥40%，判为阳性；被检血清阻断率≤32%，判为阴性；被检血清阻断率介于32%～40%，则应在14 d后对动物进行重新检测。敏感性和特异性试验结果显示，建立方法的最低检测限为血清效价1∶1 000，仅有O型FMDV VLPs疫苗免疫阳性血清能发生竞争性结合，O型和A型FMDV灭活疫苗免疫猪阳性血清无竞争性结合。90份O型FMDV VLPs疫苗免疫猪血清样品的阻断率结果符合体液免疫应答的一般规律，证明该方法可以有效评估O型FMDV VLPs疫苗免疫后血清抗体水平。本试验建立的FMDV VLPs疫苗抗体竞争ELISA检测方法可为开发更多VLPs疫苗检测技术提供技术支撑。
关键词：O型口蹄疫;;类病毒颗粒(VLPs);;竞争ELISA
基金资助：呼和浩特市重大科技专项（2021-农-重-5）
