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作者：侯欣怡;王建发;连帅;耿子健;武瑞;
单位：黑龙江八一农垦大学动物科技学院;佳木斯大学生物与农业学院;
摘要：为了建立一种基于牛白血病病毒（BLV）env结构基因的高效、便捷和特异的重组酶介导等温扩增（RAA）快速检测方法，本试验利用DNAMAN进行序列比对，构建重组质粒pESI-env，设计并筛选RAA引物和探针，建立反应体系，进一步优化反应程序和引物探针用量，建立检测方法，并评价所建立方法的特异性、灵敏性和重复性，将该方法对临床样本的检测结果与酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量PCR(qPCR)进行比对。结果显示，最佳引物探针组合为F4/R1/P；该方法在20 min即可完成反应；与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛轮状病毒（BRV）无交叉反应，最低检出限可达1.62×10~1 copies/μL，且重复性良好；建立方法的临床样本阳性检出率略高于ELISA和qPCR两种标准检测方法。本试验成功建立了一种高效、便捷且特异性强的BLV RAA荧光检测方法，摆脱了传统方法对昂贵设备、专业人员和检测技术的依赖，为BLV的临床检测提供了技术支持。
关键词：牛白血病病毒(BLV);;重组酶介导等温扩增(RAA);;快速检测方法
基金资助：国家自然科学基金项目（31972747）
