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作者：王洪升;唐小千;绳秀珍;邢婧;迟恒;战文斌;
单位：海水养殖教育部重点实验室(中国海洋大学);青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室;
摘要：病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV)是一种对冷水鱼类具有高致死率的弹状病毒，在世界范围内广泛流行，严重危害水产养殖业安全和水生生物多样性。为了实现该病的便捷、快速、灵敏诊断，本文基于RPA和CRISPR/Cas技术，通过RPA引物和crRNA筛选及检测体系优化，结合侧向流层析技术与荧光显色法，构建了VHSV的快速检测体系。研究表明，RT-RPA在39℃下反应30 min可获得最佳扩增效果，通过CRISPR/Cas12a与侧向流层析技术的结合使用可在50 min内完成病毒样本的检测，检测结果可通过肉眼直接判断。该检测方法的检测限为9 copies/μL,与同属的传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和牙鲆弹状病毒(HIRRV)之间无交叉反应，表现出较高的灵敏度与特异性。临床样本检测结果显示，本方法与RT-PCR检测结果一致，均表现出较高的准确性与稳定性。本研究构建了一种VHSV的RPA-CRISPR/Cas12a检测方法，为VHSV的便捷、快速诊断提供了重要的技术支撑。
关键词：病毒性出血性败血症病毒;;重组酶聚合酶扩增;;CRISPR/Cas12a;;便捷诊断;;快速检测;;牙鲆
基金资助：国家重点研究发展计划项目(2023YFD2400704)资助~~
