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作者：郭昊;乌东高娃;赵洪哲;刘春羽;侯丽娜;王凤雪;温永俊;
单位：内蒙古农业大学兽医学院,农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室;
摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）给养猪业带来巨大经济损失，尽快建立该病毒的快速诊断方法尤为重要。PRRSV ORF4基因编码的结构蛋白GP4为病毒感染所必须。本研究为制备GP4单克隆抗体，选取ORF4优势序列优化合成，连入pET-32a原核表达载体，构建重组质粒pET-32a-ORF4；经双酶切验证后，转化至BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达并纯化；经SDS-PAGE及Westernblot鉴定成功后免疫小鼠，制备筛选单克隆抗体，对制备的单克隆抗体进行验证。结果表明，GP4蛋白以可溶形式表达，大小为30 kDa；纯化蛋白免疫小鼠后，共筛选4株IgG亚型阳性杂交瘤细胞株；所制备单克隆抗体可与抗原特异性结合。本研究为PRRSV诊断方法的建立及后续研究奠定了基础。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;;GP4蛋白;;原核表达;;单克隆抗体
基金资助：内蒙古自治区自然科学基金项目（2020MS03047）;; 内蒙古农业大学高层次人才引进项目（NDGCC2016-22）
