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作者：陈世钰;蒋亚君;鑫婷;崔帅;王洋;郭晓宇;贾红;朱鸿飞;
单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;
摘要：本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒（ASFV）MGF360-13L基因原核表达系统表达13L蛋白，并制备其鼠源多克隆抗体。利用生物信息学方法，对ASFV MGF360-13L基因进行序列比对，分析其同源性、构建遗传进化树；将非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因密码子优化后进行合成，连接至PET32a载体构建重组质粒pET32a-13L，转化至E.coliBL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达获得目的蛋白，采用镍柱纯化法进行蛋白纯化。将纯化后的蛋白乳化后免疫8周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体，间接ELISA和Western blot检测抗体特异性。SDS-PAGE结果显示，重组蛋白分子量大小为58.2 kDa，主要以包涵体形式存在；Western blot结果显示免疫猪阳性血清可特异性识别该蛋白，具有良好的反应性，表明该重组蛋白获得正确表达。利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体进行Western blot，结果显示其能与MGF360-13L重组蛋白发生特异性反应。间接ELISA测定抗体效价高达1∶256 000。本研究成功制备非洲猪瘟病毒MGF360-13L重组蛋白，以其为免疫原制备的多克隆抗体具备较高的特异性和反应性，为进一步阐述MGF360-13L蛋白的生物学功能和研制非洲猪瘟新型疫苗奠定了基础。
关键词：非洲猪瘟病毒;;MGF360-13L基因;;序列分析;;原核表达;;多克隆抗体
基金资助：中国农业科学院基本科研业务费专项（Y2019YJ07-05）
