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作者：陈怀君;袁橙;袁圣;陈智怡;张紫菡;朱善元;王晓晔;郭长明;
单位：广西大学动物科学技术学院;江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室;
摘要：为研究nrdD基因对无乳链球菌毒力的影响，本研究参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号：NC＿018646)的nrdD全基因序列设计引物，采用融合PCR的方法将nrdD基因上、下游同源臂连接到一起，构建nrdD基因上、下游同源臂融合片段，连接至温敏型自杀质粒pSET4s。PCR克隆含有启动子序列的nrdD基因，连接至链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET2。分别构建nrdD基因的缺失株ΔnrdD及互补株CΔnrdD。经PCR和基因测序，证明nrdD基因的缺失株及互补株构建成功。通过对ΔnrdD和CΔnrdD的形态学变化的观察，生长速率、小鼠血清中增殖能力、小鼠组织载量的测定以及小鼠攻毒试验的分析，评价nrdD基因对无乳链球菌毒力的影响。结果表明：与野生株GD201008-001相比，ΔnrdD在细菌染色形态上链长明显增加，但不影响荚膜的形成；在相同培养条件下，ΔnrdD在与GD201008-001生长速率无明显差异；在小鼠血清中增殖试验中，ΔnrdD在血清中的增殖能力较野生株明显减缓；在小鼠感染14 h后，ΔnrdD在其血液、脾脏及脑部的载量明显低于野生株，而CΔnrdD在各组织中的载量与野生株相比差异不显著；小鼠的攻毒试验显示，ΔnrdD注射组小鼠存活时间较野生株与互补株延长，差异显著。研究证明，nrdD基因与无乳链球菌毒力密切相关，本试验结果也为深入研究无乳链球菌nrdD基因的功能奠定了基础。
关键词：无乳链球菌;;nrdD基因;;基因缺失株;;毒力
基金资助：江苏省高等学校自然科学研究面上项目(19KJB230005);; 泰州市科技支撑计划(农业)项目(TN201916);; 泰州市311高层次人才培养工程([2019]21号);; 江苏农牧科技职业学院科研项目(NSF20190202);; 江苏高校“青蓝工程”项目(苏教师函[2021]11号)
