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作者：陆杏蓉;邓廷贤;郑海英;杨春艳;韦科龙;钟华配;段安琴;马小娅;徐媛媛;尚江华;
单位：广西水牛研究所,农业农村部水牛遗传繁育技术重点实验室,广西水牛遗传繁育重点实验室;
摘要：试验旨在探讨PTHLH基因过表达对水牛卵泡颗粒细胞活性的影响，以及PTHLH基因对增殖、表观修饰和多能性相关基因表达模式的调控作用，为理解卵泡颗粒细胞和卵泡发育的分子调控机制提供新的视角。采用脂质体转染法将PTHLH基因过表达载体转染到水牛卵泡颗粒细胞中；利用MTT细胞活性检测试剂测定细胞活性；用STRING在线分析PTHLH及相关蛋白的互作网络；用qRT-PCR检测转染后水牛卵泡颗粒细胞中增殖、表观修饰和多能性相关基因的表达情况，分析PTHLH基因过表达对水牛卵泡颗粒细胞相关基因表达的影响。结果显示，PTHLH基因过表达极显著降低了水牛卵泡颗粒细胞的活性（P<0.000 1）；过表达组细胞中增殖相关基因（CCNB1、CCND1、CDKN1B、CDKN1A和CDK2）的表达极显著下调（P<0.000 1）；甲基化相关基因DNMT1和羟甲基化相关基因TET3的表达极显著下调（P<0.001或P<0.01），甲基化相关基因DNMT3B和IDH1的表达显著下调（P<0.05），而羟甲基化相关基因TET1和TET2的表达显著上调（P<0.05）；乙酰化相关基因（HDAC1、HDAC2、HAT1、P300和CBP）的表达极显著下调（P<0.001或P<0.000 1）；与此同时，多能性相关基因OCT4和SOX2的表达极显著上调（P<0.01或P<0.001），而NANOG基因的表达极显著下调（P<0.01）。综上，PTHLH基因过表达抑制了水牛卵泡颗粒细胞的细胞活性，对增殖相关基因（CCNB1、CCND1、CDKN1B、CDKN1A和CDK2）、甲基化相关基因DNMT1与羟甲基化相关基因TET3、乙酰化相关基因（HDAC1、HDAC2、HAT1、P300和CBP）和多能性相关基因NANOG的表达具有负调控作用，而对羟甲基化相关基因TET1和TET2，以及多能性相关基因OCT4和SOX2的表达具有正调控作用。
关键词：水牛;;PTHLH基因;;卵泡颗粒细胞;;基因表达
基金资助：广西自然科学基金面上项目（2021GXNSFAA220004,2022GXNSFAA035522）;; 国家现代农业产业技术体系广西奶水牛产业创新团队（nycytxgxcxtd-2021-21-01）
