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作者：李钰钰;姚继英;田永路;孙甜甜;韦玉生;李夏莹;
单位：北京大学生命科学学院实验动物中心;北京大学心理与认知科学学院;
摘要：该研究旨在建立和优化一种针对实验动物肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae,KP）的TaqMan实时荧光定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测方法，以提高检测的灵敏度、特异性和准确性。通过文献调研和序列比对，选取了KP的phoE基因作为目标序列，设计并合成一对特异性引物和探针，对qPCR反应体系和退火温度进行了系统优化，采用梯度稀释法测定了该方法的线性范围、灵敏度和检测限。通过分析不同浓度标准品的qPCR曲线，评估了该方法的特异性和方法再现性。最后将该方法用于各种临床样品检测。优化后的qPCR方法显示出良好的线性关系，线性范围为2.7×104～8.64 copies/μL，线性回归方程为y=–3.83x+42.865，相关系数（R~2）为0.992。检测限达到8.64 copies/μL，表明该方法具有较高的灵敏度。特异性实验结果表明，该方法仅对KP产生特异性扩增，与其他常见病原体无交叉反应。统计不同操作人员对检测极限样品的10个平行Ct值，结果显示，Ct值的相对标准偏差均低于2%，说明方法具有良好的再现性。共检测26份临床样本，有3份临床样本为阳性，其他均为阴性。本研究成功建立了一种高灵敏度、高特异性的KP qPCR检测方法，为实验动物中的KP感染提供了一种快速、准确的分子诊断工具。
关键词：肺炎克雷伯杆菌;;荧光定量PCR;;实验动物
