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作者：郑壮彬;毕利军;张立群;
单位：首都医科大学附属北京胸科医院结核科/北京市结核病胸部肿瘤研究所结核科;广州国家实验室检测与诊疗技术研究部;
摘要：目的:表达和纯化结核分枝杆菌膜蛋白MmpS5和MmpL5,并检测二者与贝达喹啉(Bdq)之间的相互作用，探究MmpS5/MmpL5外排泵系统导致Bdq耐药的具体转运机制。方法:构建MmpS5和MmpL5蛋白的表达质粒，在HEK293F真核细胞和耻垢分枝杆菌中分别诱导表达纯化的MmpS5和MmpL5蛋白。采用差示扫描荧光法(differential scanning fluorimetry, DSF)和竞争性酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测Bdq与MmpS5和MmpL5蛋白之间的相互作用。结果:成功构建了MmpS5和MmpL5蛋白的表达质粒，并在HEK293F细胞中表达纯化MmpS5蛋白，在耻垢分枝杆菌中表达纯化MmpL5蛋白。DSF实验显示，随着Bdq浓度的增加，MmpS5的蛋白熔解温度(melting temperature, Tm)略有降低，而MmpL5的Tm明显上升，最大增幅达5.98℃,提示MmpL5蛋白与Bdq存在结合；进一步行竞争性ELISA检测，显示随着未标记Bdq浓度的增加，MmpL5的吸光度值显著降低，表明MmpL5与生物素标记的Bdq存在相互作用，且该相互作用可被未标记Bdq竞争性抑制。结论:在MmpS5/MmpL5外排泵系统中，MmpL5蛋白与Bdq存在直接相互作用，而MmpS5蛋白与Bdq无明显相互作用，提示MmpL5可能直接外排Bdq,而MmpS5蛋白主要发挥辅助作用，不直接参与外排Bdq。这为深入理解MmpS5/MmpL5外排泵系统在Bdq耐药性中的作用机制提供了重要的研究基础。
关键词：分枝杆菌,结核;;膜蛋白质类;;药理作用分子作用机制;;贝达喹啉
基金资助：广州国家实验室专项项目(GZNL2024A01023);; 国家自然科学基金(32394014)~~
