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作者：黄晓洁;杜伟丽;赵宏;苏丹;刘子臣;赵颖丽;刘毅;车南颖;
单位：首都医科大学附属北京胸科医院病理科/北京市结核病胸部肿瘤研究所;首都医科大学附属北京胸科医院生物样本与数据资源库/北京市结核病胸部肿瘤研究所;
摘要：目的：建立结核病病理质控蜡块制备方法，并对质控蜡块进行细胞形态、结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）分布及MTB DNA分布方面的性能评估。方法：用灭活MTB H37Rv悬液和恶性胸腔积液细胞沉淀混合，以2%琼脂为基质制备MTB浓度不同的蜡块，磷酸盐缓冲液代替MTB悬液制作阴性蜡块。每个圆柱体琼脂块沿纵轴等距分为4层（每层厚约3mm），每层制成1个蜡块，形成分层样本组。通过HE染色评估细胞形态完整性及空间分布均匀性，抗酸染色和荧光定量PCR(real-time PCR,qPCR)分析各组MTB数量、IS6110拷贝数及其对应琼脂块纵轴方向MTB分布的均一性。结果：成功制备了适用于MTB抗酸染色和MTB DNA检测的蜡块质控品。HE染色显示蜡块中各种细胞形态完整且空间分布均匀。抗酸染色显示，理论MTB量为0.0336、0.336、3.36个/切片的分层样本组中，每组蜡块对应的4张切片各有0、1和2张切片阳性，检测结果不稳定，不宜作为抗酸染色阳性质控品；理论MTB量为33.6、336个/切片的分层样本组中，每个蜡块对应的切片中均找到MTB，为合格抗酸染色质控品，MTB平均密度分别为（21.50±9.26）条/300视野和（169.25±40.25）条/300视野。qPCR结果显示，理论MTB量为0.0336个/切片的分层样本组中，有3个蜡块检测为阳性，1个为阴性，结果存在波动，为不合格分子检测质控品；理论MTB量为0.336、3.36、33.6、336个/切片的分层样本组中，检测均阳性，IS6110基因拷贝数分布为（6.48±3.54）拷贝/5张切片、（26.53±6.65）拷贝/5张切片、（283.93±98.51）拷贝/5张切片、（4446.75±833.84）拷贝/5张切片，扩增Ct值变异系数均<5%，各组对应琼脂块纵轴方向上MTB均匀分布，为合格的分子检测质控品。阴性质控品抗酸染色均为阴性、qPCRIS6110均无扩增。结论：本研究成功建立了结核病病理诊断质控品制备方案。推荐使用至少33.6个/切片的MTB制备抗酸染色的质控品，至少0.336个/切片的MTB用于制备分子检测质控品，并根据检测方法的检出限及不同应用场景选择起始MTB量。
关键词：分枝杆菌,结核;;诊断;;病理学;;质量控制;;评价研究
基金资助：国家自然科学基金(82072381,82472378);; 北京市属医学科研院所公益发展改革试点项目(JYY2023-15);; 北京研究型病房卓越计划(BRWEP2024W042160103);; 北京市医院管理中心“登峰”人才培养计划(DFL20241601)~~
