来源：期刊VIP网 时间：
作者：王婷;宋小鸽;阮静茹;韩啸宇;王雨晴;向婷婷;李奎武;朱敬伟;方誉澄;王子叶;储浩然;
单位：安徽中医药大学第二临床医学院;安徽中医药大学针灸经络研究所;安徽中医药大学第二附属医院/安徽省针灸医院名医堂;安徽省中医药科学院针灸临床研究所;安徽省针灸临床医学研究中心;
摘要：目的：观察艾灸干预对腹泻型肠易激综合征（IBS-D）大鼠磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响，探讨艾灸调节肠上皮细胞自噬水平、保护IBS-D大鼠肠黏膜屏障的可能机制。方法：将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、艾灸+LY294002组，每组10只。采用醋酸刺激+慢性束缚法制备IBS-D模型。艾灸组予悬灸大鼠双侧“天枢”“上巨虚”20 min；艾灸+LY294002组予艾灸干预前30 min腹腔注射PI3K抑制剂LY294002(0.75 mg/kg)。两组均每日干预1次，连续7 d。在造模前、后及干预后，测定各组大鼠腹部回撤反射（AWR）评分达到3分时的最小注水量；HE染色法观察大鼠结肠黏膜炎性损伤；透射电镜观察结肠黏膜线粒体结构及自噬小体数量；Western blot法检测结肠咬合蛋白（Occludin）、闭锁连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白2(Claudin-2)、p62蛋白表达及磷酸化（p）-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、微管相关蛋白轻链（LC）3B-Ⅱ/Ⅰ比值；实时荧光定量PCR法检测大鼠结肠PI3K、AKT、mTOR、Occludin、ZO-1、Claudin-2 mRNA的表达水平。结果：与正常组比较，模型组大鼠AWR最小注水量降低（P<0.01），肠上皮细胞排列欠规则，可见炎性细胞局部浸润，电镜下见多个自噬小体，结肠p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值及Occludin、ZO-1、p62蛋白表达，PI3K、AKT、mTOR、Occludin、ZO-1 mRNA表达水平均降低（P<0.01）,Claudin-2蛋白及mRNA表达、LC3B-Ⅱ/Ⅰ比值均升高（P<0.01）。与模型组比较，艾灸组大鼠AWR最小注水量升高（P<0.05），肠黏膜结构相对完整，炎性细胞浸润减少，电镜下自噬小体数量减少，结肠p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值及Occludin、ZO-1、p62蛋白表达，PI3K、AKT、mTOR、Occludin、ZO-1 mRNA相对表达水平均升高（P<0.01）,Claudin-2蛋白及mRNA表达、LC3B-Ⅱ/Ⅰ比值均降低（P<0.01）。与艾灸组比较，艾灸+LY294002组大鼠肠黏膜结构相对紊乱，炎性细胞浸润增加，电镜下自噬小体增多，其他指标均不同程度回调（P<0.01,P<0.05）。结论：艾灸可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路，降低IBS-D大鼠肠上皮细胞自噬水平，从而减轻IBS-D大鼠肠上皮损伤，保护肠黏膜屏障。
关键词：腹泻型肠易激综合征;;艾灸;;内脏痛;;磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路;;肠黏膜屏障;;自噬
基金资助：国家自然科学基金项目(No.81774399);; 安徽省临床医学转化专项(No.202204295107020046);; 安徽省针灸临床医学研究中心开放基金项目(No.2021zjzx01);; 合肥综合性国家科学中心大健康研究院新安医学与中医药现代化研究所“揭榜挂帅”项目(No.2023CXMMTCM017)
