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作者：徐慧超;吴田;郝健亨;武荣林;闫炳北;王海军;冀来喜;
单位：山西中医药大学第二临床学院;
摘要：目的：观察电针“肠病方”对溃疡性结肠炎（UC）大鼠结肠细胞自噬、肠道菌群的影响，探讨电针治疗UC的作用机制。方法：将32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、电针（EA）组、假电针（SEA）组，每组8只。除对照组外，其余组大鼠自由饮用5%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液7 d建立UC大鼠模型。EA组大鼠予电针“肠病方”，穴取“中脘”和双侧“天枢”“上巨虚”，同侧“天枢”与“上巨虚”连接电针，选择疏密波，频率10 Hz/50 Hz，每次20 min;SEA组在EA组穴位外侧5 mm处进行浅透皮穿刺，电针参数与电针组相同，均每日1次，连续干预3 d。每日测量大鼠体质量，干预前后评估大鼠疾病活动指数（DAI）评分。干预后，测量大鼠结肠长度；采用HE法观察大鼠结肠组织形态，并评定结肠组织病理学评分；ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-1β、IL-2、IL-10含量；透射电镜观察大鼠结肠组织超微结构；Westernblot法检测大鼠结肠组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关基因（ATG）5、ATG12、顺序相关泛素结合蛋白1(p62)、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）蛋白表达；实时荧光定量PCR法检测大鼠结肠组织PI3K、AKT、mTOR mRNA表达；16S rRNA基因测序分析大鼠粪便肠道菌群结构。结果：第1～7天，与对照组比较，模型组、EA组、SEA组体质量降低（P<0.05,P<0.01）；第9～10天，与模型组和SEA组比较，EA组体质量增加（P<0.05,P<0.01）。干预前，与对照组比较，模型组、EA组、SEA组DAI评分升高（P<0.01）；干预后，与模型组和SEA组比较，EA组DAI评分降低（P<0.01）。与对照组比较，模型组结肠长度缩短（P<0.01），结肠组织出现畸变隐窝，黏膜层变薄，杯状细胞减少，有炎性细胞浸润，组织整体结构混乱，结肠组织病理学评分升高（P<0.01）；血清TNF-α和IL-1β含量升高（P<0.01）,IL-2和IL-10含量降低（P<0.01）；结肠上皮细胞结构紊乱，纤毛脱落，细胞质内有大量空泡，线粒体肿胀、结构不清、部分嵴消失，少见自噬体存在；结肠组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值及ATG5、ATG12蛋白表达降低（P<0.01）,p62、PI3K蛋白表达及p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR值升高（P<0.01）,PI3K、AKT、mTOR mRNA表达升高（P<0.01）;Chao1、Ace、Shannon指数降低（P<0.01），门水平上，厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度降低（P<0.05），拟杆菌门（Bacteroidetes）和变形菌门（Proteobacteria）相对丰度升高（P<0.05,P<0.01），属水平上，乳杆菌属（Lactobacillus）相对丰度降低（P<0.05），拉克诺斯皮拉科NK4A136组（Lachnospiraceae＿NK4A136＿group）和考拉杆菌属（Phascolarctobacterium）相对丰度升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组和SEA组比较，EA组结肠长度增加（P<0.01），结肠组织炎性细胞浸润减少，肠上皮细胞排列较整齐，有少量脱落，结肠病理组织学评分降低（P<0.01）；血清TNF-α和IL-1β含量降低（P<0.01）,IL-2和IL-10含量升高（P<0.01）；结肠上皮细胞排列较整齐，细胞器形态基本正常，可见明显的自噬体；结肠组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值及ATG5、ATG12蛋白表达升高（P<0.01,P<0.05）,p62、PI3K蛋白表达及p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR值降低（P<0.01）,PI3K、AKT、mTOR mRNA表达降低（P<0.01）;Chao1、Ace、Shannon指数升高（P<0.01），门水平上，Firmicutes相对丰度升高（P<0.01）,Bacteroidetes相对丰度降低（P<0.01），属水平上，Lactobacillus相对丰度升高（P<0.05）,Lachnospiraceae＿NK4A136＿group相对丰度降低（P<0.01）。与模型组比较，EA组门水平Proteobacteria相对丰度降低（P<0.05），属水平Phascolarctobacterium相对丰度降低（P<0.05）。结论：电针“肠病方”可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路调控结肠细胞自噬，并改善肠道菌群，从而缓解UC症状。
关键词：溃疡性结肠炎;;电针;;肠病方;;自噬;;肠道菌群
基金资助：国家自然科学基金资助项目：82074549;; 山西省自然科学基金资助项目：202303021221156;; 山西省高等学校科技创新项目：2024L262;; 山西中医药大学博士科研启动基金项目：2024BK14;; 山西省中医药管理局科研课题项目：2024ZYY2C109
