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作者：刘欣雨;张新昌;黄正;刘倩倩;赵艺;陆天靓;张智慧;倪光夏;
单位：南京中医药大学针灸推拿学院·养生康复学院;南京中医药大学针药结合教育部重点实验室;
摘要：目的：观察“醒脑开窍”针刺法对脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠缺血侧皮质区N6-甲基腺苷（m6A甲基化水平及关键甲基转移酶、去甲基化酶表达的影响，探讨针刺改善CIRI的作用机制。方法：从68只SPF级雄性SD大鼠中随机选取15只作为假手术组，其余大鼠采用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型，缺血2 h后再灌注实现CIRI，剔除造模失败及中途死亡大鼠，将剩余的45只大鼠随机分为模型组、针刺组、非穴位针刺组，每组15只。针刺组予“醒脑开窍”针刺法干预，穴取双侧“内关”及“水沟”；非穴位针刺组于双侧腋中线下3 mm处及尾骨尖旁开3 mm处3个非穴位点行针刺干预。两组均针刺1次，留针30 min。造模前及缺血2 h后采用激光散斑血流仪监测大鼠脑血流灌注量；于缺血2 h后、再灌注后24 h评定大鼠神经行为学评分；采用氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法测定大鼠脑梗死体积；Dot blot法检测大鼠缺血侧皮质区m6A甲基化水平；Western blot法及实时荧光定量PCR法检测大鼠缺血侧皮质区关键去甲基化酶脂肪量和肥胖相关蛋白（FTO）、AlkB同源蛋白5(ALKBH5)及关键甲基转移酶甲基转移酶样3(METTL3)、甲基转移酶样14(METTL14)、辅助蛋白Wilms肿瘤1相关蛋白（WTAP）蛋白及mRNA表达。结果：缺血2 h后大鼠脑血流灌注量降低>70%。与假手术组比较，模型组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积百分比升高（P<0.01），缺血侧皮质区m6A甲基化水平升高（P<0.01）,FTO蛋白及mRNA表达降低（P<0.01）,ALKBH5、METTL3、METTL14蛋白及mRNA表达升高（P<0.01,P<0.05）；与模型组和非穴位针刺组比较，针刺组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积百分比降低（P<0.01），缺血侧皮质区m6A甲基化水平降低（P<0.01,P<0.05）,FTO蛋白及mRNA表达升高（P<0.01）。结论：“醒脑开窍”针刺法可对脑缺血再灌注损伤大鼠发挥脑保护作用，其作用机制可能与上调FTO表达，进而调控m6A甲基化修饰有关。
关键词：脑缺血再灌注损伤;;针刺;;m6A甲基化修饰;;脂肪量和肥胖相关蛋白
基金资助：国家自然科学基金资助项目：82074525、82205238
