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作者：柳思思;张晓琳;崔英姿;王文珂;李志琴;马春蕾;时尚;张莹;李波清;
单位：滨州医学院基础医学院;
摘要：目的 研究幽门螺杆菌（H. pylori）协同YAP调控自噬和胃癌干细胞干性对胃癌转移和侵袭能力的影响机制。方法 H.pylori、自噬抑制剂氯喹（CQ）单独或联合与转染过表达YAP基因的HGC-27胃癌细胞（H2）或转染空载体的HGC-27胃癌细胞（HN2）共培养，划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的变化情况。所有体外实验每组设3个技术复孔并独立重复3次，采用Image J量化并以单因素方差分析或三因素方差分析分析差异。尾静脉注射法构建无特定病原体（SPF）级BALB/c-nu雌鼠的H2细胞和HN2细胞肝转移模型，8周后收集肝脏，苏木精–伊红染色观察组织病理变化，免疫组化检测EpCAM/CD326、Claudin 18、LC3BⅡ及P62蛋白的表达水平，实时荧光定量PCR方法检测胃癌干细胞标志物CD133、Lgr5和CD44的mRNA转录水平。结果 H. pylori感染显著增强了胃癌细胞的迁移和侵袭能力，划痕实验显示HN2+H. pylori组细胞迁移率较对照组增加26.88%,Transwell实验显示迁移细胞数增加34.91%。YAP过表达进一步放大了H. pylori的促转移效应，H2+H.pylori组较HN2+H. pylori组迁移率增加48.59%，侵袭细胞数增加85.00%。自噬抑制剂CQ处理可显著逆转这一效应，使H2+H. pylori+CQ组迁移率降至（32.39±1.19）%，侵袭细胞数降低24.68%，证实自噬在该过程中的核心调控作用。在动物模型中，免疫组化结果显示，除对照组外，其余各组肝组织中均检测到不同程度的EpCAM/CD326和Claudin 18阳性表达，提示胃癌细胞肝转移模型构建成功。免疫组化结果进一步表明，H. pylori感染显著增强了胃癌细胞的转移潜能，其中HN2+H. pylori组中CD326和Claudin 18表达分别达到38.39%和19.73%，较对照组显著升高。YAP过表达进一步放大了该促转移效应，H2+H.pylori组的EpCAM/CD326和Claudin 18表达分别升至60.85%和66.80%，较HN2+H. pylori组显著升高。CQ干预可部分逆转该效应，H2+H. pylori+CQ组中EpCAM/CD326和Claudin 18的表达分别降至44.17%和16.66%，较未处理组下降显著。H. pylori感染显著加重肝组织病理损伤，表现为肝窦扩张、炎症浸润和细胞排列紊乱。YAP过表达联合H. pylori感染组表现出更严重的肝组织结构破坏，包括肝窦显著扩张充血、大量炎症细胞浸润以及明显的坏死变性。通过自噬抑制剂CQ干预可有效改善这些病理改变，显著减轻肝窦扩张和炎症浸润程度。LC3BⅡ和P62蛋白的免疫组化结果显示，H. pylori感染和YAP过表达协同促进自噬过程，表现为LC3BⅡ表达上调和P62表达下调。自噬抑制剂CQ处理可有效阻断自噬流，进一步证实了YAP依赖性自噬通路在H. pylori促胃癌转移中的核心调控作用。此外，H. pylori感染和YAP过表达协同上调了胃癌干细胞标志物（CD133、Lgr5和CD44）的mRNA表达水平，而CQ处理可部分逆转这一效应。2×2×2三因素析因分析显示YAP、H. pylori与CQ在全部10项指标上均具有显著主效应，YAP与H.pylori的交互作用显著提升划痕迁移率、Transwell迁移数、Transwell侵袭数以及CD133、Lgr5、CD44、EpCAM/CD326、Claudin 18、LC3BⅡ、P62等指标；H. pylori与CQ的交互作用在侵袭能力及Lgr5、CD44、CD133和Claudin 18的表达上均表现出显著影响；三因素交互作用则在划痕迁移率、侵袭能力以及Claudin 18、EpCAM/CD326和P62的表达上呈现显著差异。结论 H. pylori协同YAP调控胃癌细胞的自噬水平并增强胃癌干细胞干性，最终促进胃癌的转移和侵袭。
关键词：幽门螺杆菌;;Yes相关蛋白;;自噬;;胃癌干细胞;;胃癌转移和侵袭
基金资助：国家自然科学基金（No.82172560）;; 泰山学者工程专项经费资助（No.tsqn202211229）;; 烟台市省级以上领军人才专项配套经费资助~~
