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作者：刘晶;刘欣;张哲祚;于顾然;李浩;刘南阳;裴卉;
单位：南京中医药大学附属医院;中国中医科学院望京医院;中国中医科学院西苑医院;
摘要：目的 采用多因素联合诱导的方式构建阿尔茨海默病（AD）虚损瘀毒证病证结合动物模型，并对其进行评价。方法 将24只2月龄SPF级C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组和角叉菜胶低（0.02%）、中（0.04%）、高（0.06%）剂量组，每组6只。采用角叉菜胶诱导血瘀模型，筛选角叉菜胶造模浓度。将30只5月龄APP/PS1小鼠随机分为毒损组、气虚组、肾虚组、虚损组和虚损瘀毒组，每组6只，另以6只5月龄C57BL/6J小鼠作为同窝对照组。利用睡眠剥夺、角叉菜胶和氢化可的松进行多因素联合诱导实验。气虚组、虚损组和虚损瘀毒组小鼠通过睡眠剥夺诱导气虚；肾虚组、虚损组和虚损瘀毒组通过氢化可的松溶液灌胃诱导肾虚；虚损瘀毒组通过角叉菜胶溶液腹腔注射以诱导血瘀。造模期间，每周观察并记录小鼠一般状态和体质量；造模结束次日，利用抓力仪检测小鼠抓力指数，水迷宫实验检测小鼠行为学指标；行为学检测结束后处死、取材，计算小鼠脾脏指数、肾脏指数、睾丸指数，尼氏染色观察小鼠海马组织形态，HE染色观察主动脉形态，免疫荧光法检测小鼠海马组织β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))沉积情况，ELISA法检测小鼠血清血管黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、皮质醇、促肾上腺皮质激素（ACTH）水平，Western Blot法检测海马组织淀粉样前体蛋白（APP）、早老蛋白1(PS1)、β位淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1(BACE1)蛋白表达。结果 筛选出0.06%浓度的角叉菜胶进行后续实验。多因素联合诱导实验结果显示，与同窝对照组比较，虚损瘀毒组小鼠造模后体质量、抓力指数下降，平台停留时间缩短、穿越平台次数减少，脾脏指数、肾脏指数、睾丸指数下降，海马组织Aβ_(1-42)荧光表达量升高，血清VCAM-1、TNF-α、IL-6、IL-1β、皮质醇水平升高，海马组织APP、BACE1、PS1蛋白表达升高（P<0.05或P<0.01），海马区神经元出现损伤，细胞核固缩，尼氏体溶解甚至消失。与毒损组、气虚组、肾虚组、虚损组比较，虚损瘀毒组更能全面反映阿尔茨海默病虚损瘀毒证的病理改变。结论 通过睡眠剥夺、角叉菜胶和氢化可的松联合诱导的方式构建了AD虚损瘀毒证小鼠病证结合模型，该模型具有气虚、肾虚、血瘀的证候特征。
关键词：阿尔茨海默病;;虚损瘀毒证;;动物模型;;病证结合
基金资助：国家重点研发计划“中医药现代化”重点专项（2022YFC3501400）
