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作者：姜盈盈;杨满翔;袁振华;席乐迎;蔡明阳;马迪雅;李一凡;牛宇航;刘润泽;曹嘉文;陈熙麟;任献青;
单位：河南中医药大学第一附属医院儿科医院;河南中医药大学儿科医学院;
摘要：目的 从快速加速纤维肉瘤激酶（RAF）/丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外信号调节激酶（ERK）通路调控中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）失衡探讨凉血退紫方治疗过敏性紫癜（HSP）血热证的可能作用机制。方法 将70只Wistar大鼠随机分为空白组14只和造模组56只。造模组大鼠采用改良的卵白蛋白（OVA）致敏联合热性中药灌胃构建HSP血热证大鼠模型，造模周期共8周。将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、复方甘草酸苷组、凉血退紫方组、RAF抑制组、凉血退紫方+RAF激动组，每组10只，另取空白组10只。造模第11周开始，空白组、模型组大鼠在0.9%氯化钠溶液0.5 ml/（kg·d）腹腔注射基础上给予1 ml/（100 g·d）超纯水灌胃；凉血退紫方组、复方甘草酸苷组在0.9%氯化钠溶液腹腔注射基础上分别给予7.5 g/（kg·d）凉血退紫颗粒混悬液灌胃、13.5 mg/（kg·d）复方甘草酸苷混悬液灌胃；RAF抑制组予1 mg/（kg·d）GW5074混悬液腹腔注射及超纯水灌胃；凉血退紫方+RAF激动组予7.5 g/（kg·d）凉血退紫颗粒混悬液灌胃及1 mg/（kg·d）紫杉醇混悬液腹腔注射。各组干预均每天1次，持续4周。干预结束后，HE染色法观察大鼠皮肤组织病理形态，免疫荧光法检测皮肤组织免疫球蛋白A(IgA)沉积情况，ELISA法检测大鼠血清中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)含量，比色法检测大鼠血清髓过氧化物酶（MPO）水平，RT-qPCR法检测大鼠皮肤组织RAF、MEK、ERK mRNA表达水平，Western Blot法检测大鼠皮肤组织RAF、MEK、ERK、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（p-MEK）、磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）水平。结果 空白组大鼠皮肤组织正常，模型组大鼠皮肤组织出现中性粒细胞浸润、红细胞破裂出血；各药物干预组大鼠皮肤组织中性粒细胞浸润、出血渗出现象明显减轻，且以凉血退紫方组大鼠改善效果显著。与空白组比较，模型组大鼠皮肤组织IgA荧光强度增强，血清NE、MPO、TNF-α及VCAM-1含量升高，RAF、MEK、ERK1、ERK2 mRNA表达升高，RAF蛋白水平及p-MEK/MEK、p-ERK/ERK比值升高（P<0.05）。与模型组比较，各药物干预组大鼠皮肤组织IgA荧光强度减弱，血清NE、MPO、TNF-α及VCAM-1水平降低（P<0.05）；凉血退紫方组及RAF抑制组大鼠皮肤组织RAF、MEK、ERK1、ERK2mRNA表达降低，RAF蛋白水平及p-MEK/MEK、p-ERK/ERK比值降低（P<0.05）。与凉血退紫方+RAF激动组比较，复方甘草酸苷组、凉血退紫方组及RAF抑制组大鼠皮肤组织IgA荧光强度减弱，血清NE、MPO、TNF-α及VCAM-1含量降低，MEK mRNA表达及p-MEK/MEK比值降低（P<0.05）。结论 凉血退紫方治疗过敏性紫癜血热证的可能机制是抑制皮肤组织RAF/MEK/ERK通路，减少NETs过度形成，从而降低皮下小血管IgA沉积及机体炎症反应。
关键词：过敏性紫癜;;血热证;;免疫球蛋白A;;中性粒细胞胞外诱捕网;;快速加速纤维肉瘤激酶;;丝裂原活化蛋白激酶;;细胞外信号调节激酶;;凉血退紫方
基金资助：国家自然科学基金（82374519）;; 河南省省级科技研发计划联合基金（优势学科培育类）项目（222301420022）;; 河南省中原英才计划（育才系列）项目（豫组通[2021]44号）;; 中国博士后科学基金（2025M773948）;; 河南省卫生健康委员会国家中医药传承创新中心联合共建科研专项（2024ZXZX1056）;; 河南省中医学“双一流”创建科学研究专项（HSRP-DFCTCM-2023-8-07、HSRP-DFCTCM-2023-3-02）
