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作者：徐刘平;杨璨宇;卢莹;莫丽莎;池强;夏媛;刘水娟;邱明亮;
单位：江西中医药大学附属医院;江西中医药大学临床医学院;
摘要：目的 探讨益肾祛痹通络方治疗类风湿关节炎（RA）的作用机制。方法 采用网络药理学方法，使用TCMSP、BATMAN、ETCM、GEO等数据库检索并筛选益肾祛痹通络方中药物活性成分、作用靶点以及RA相关靶点，对药物活性成分靶点和RA靶点取交集，构建蛋白相互作用（PPI）网络图，进行GO和KEGG通路富集分析，并构建益肾祛痹通络方治疗RA的药物-活性成分-共同靶点网络。将益肾祛痹通络方核心活性成分与核心靶点进行分子对接验证。将人RA滑膜成纤维细胞株MH7A细胞分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、益肾祛痹通络方组。空白组予10%胎牛血清，其余三组均予浓度为10μg/L的重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激24 h制备RA细胞模型；甲氨蝶呤组在模型组基础上加入20μmol/L浓度的甲氨蝶呤混悬液，益肾祛痹通络方组加入10%益肾祛痹通络含药血清。干预48 h后采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、白细胞介素-17A(IL-17A)水平，RT-qPCR法检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR） mRNA表达。结果 网络药理学分析显示，得到益肾祛痹通络方209个药物活性成分和583个靶点基因，RA相关靶点818个；将药物活性成分和RA靶点基因取交集后获得29个共同靶点；槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、豆甾醇、木犀草素是益肾祛痹通络方治疗RA的核心活性成分，基质金属蛋白酶9(MMP9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、Toll样受体4(TLR4)、肿瘤蛋白p53(TP53)、转录因子AP-1亚基（JUN）是核心靶点；GO和KEGG通路富集分析结果涉及抗氧化反应、PI3K-AKT信号通路、Toll样受体（TLR）信号通路等。分子对接结果显示，MMP9、PTGS2分别与槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、豆甾醇、木犀草素，TLR4与β-谷甾醇、豆甾醇、木犀草素，TP53与木犀草素均具有高结合活性。细胞实验结果表明，与空白组比较，模型组细胞IL-17A、TNF-α水平以及AKT、mTOR mRNA表达升高（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，益肾祛痹通络方组上述各指标均降低，甲氨蝶呤组TNF-α水平、AKT mRNA表达降低（P<0.05或P<0.01）。结论 益肾祛痹通络方治疗RA的作用机制与减少炎症因子分泌、抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路激活有关。
关键词：类风湿关节炎;;网络药理学;;分子对接;;细胞实验;;益肾祛痹通络方
基金资助：国家自然科学基金（82260912,82560917）;; 江西省应用研究培育项目（20212BAG70038）;; 江西省卫生健康委中医药科研项目（2024A0105,2024B0332）
