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作者：袁硕龙;徐良慰;黄文捷;周舸晖;陈伟;
单位：解放军总医院第六医学中心耳鼻咽喉头颈外科医学部;听觉与平衡觉全国重点实验室;国家耳鼻咽喉疾病临床医学研究中心;聋病教育部重点实验室;解放军医学院;
摘要：目的 本研究旨在开发一种完全免用剧毒四氧化锇的耳蜗扫描电子显微镜样本制备方法，以规避其高毒性、严苛操作及安全风险。方法 选取健康听力豚鼠3只，取6耳蜗，通过2.5%戊二醛一次性灌流固定24 h替代传统四氧化锇二次固定，经10%EDTA脱钙液3 d及显微解剖完整暴露基底膜后，执行梯度乙醇脱水及二氧化碳临界点干燥消除水分，最终通过优化多角度离子溅射镀膜，在样本表面形成均匀5～10 nm厚的金属膜。结果 耳蜗样本无四氧化锇导致的锇黑或结构形变，低倍镜清晰呈现耳蜗整体形态与各回毛细胞分布，中倍镜下内外毛细胞纤毛束整齐排列、表皮板微绒毛可见，高倍镜和超高倍镜分别确认内毛细胞纤毛间距均一性及外毛细胞纤毛间精细链接结构。结论 该方法成功克服四氧化锇缺失导致的导电性与对比度缺陷，成像分辨率与传统四氧化锇法相当，尤其纤毛亚微米级细节（如侧链接）清晰可辨。该技术通过戊二醛固定联合精准控制离子溅射工艺彻底消除了剧毒试剂相关的安全合规壁垒，显著降低实验复杂度与成本，为内耳超微形态学研究提供了安全、高效且适合普通实验室的高质量解决方案。
关键词：四氧化锇;;耳蜗;;扫描电子显微镜;;纤毛
基金资助：科技部重点研发计划（2022YFC2402701）
