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作者：胡耕;王东艳;龚成;祝双利;李茂中;王雪;李爱华;罗明;
单位：北京市疾病预防控制中心;中国疾病预防控制中心(中国预防医学科学院)病毒病预防控制所;
摘要：目的 系统评价普通聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)和实时荧光定量PCR(Quantitative PCR, qPCR)检测细胞支原体的效能，为病原微生物实验室质量控制提供技术保障。方法 使用中国和欧洲药典要求检测的支原体质控品和实验室留存并经二代测序验证的支原体阴性和阳性样本，比较普通PCR和5种qPCR试剂盒(试剂A、B、C、D和E)引物的支原体检测覆盖度和灵敏度，评估5种qPCR试剂盒的精密度和特异性并进行实验室样本检测验证。结果 普通PCR法上下游引物覆盖58种支原体，5种qPCR分别覆盖110种、129种、39种、169种、180种支原体。普通PCR仅检出6种支原体质控品中的2种，检测限>10~6拷贝/mL;qPCR试剂A、B、D、E可检出6种支原体，检测限为10~2～10~3拷贝/mL,试剂C仅检出6种支原体质控品中的精氨酸支原体和人型支原体，检出限分别为8 800拷贝/mL和2 000拷贝/mL。5种试剂检测6种支原体质控品的Ct值平均变异系数分别为1.01%、1.16%、1.75%、0.93%、1.39%。试剂A、B、D、E的特异性均为100%;试剂C在3种常见条件致病菌检测中出现非特异性扩增。试剂A、B、C、D、E检测10份阳性样本的符合率分别为100%、70%、90%、100%、100%,检测10份阴性样本的假阳性率分别为0%、0%、20%、0%、0%。结论 qPCR检测细胞支原体的覆盖度和灵敏度显著优于普通PCR,且具有良好的精密度和特异度，推荐采用qPCR作为细胞支原体常规检测方法。
关键词：细胞系;;支原体;;支原体污染;;普通聚合酶链反应;;实时荧光定量聚合酶链反应
