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作者：曹文艳;江佳欣;袁子钦;王亚楠;王自良;王磊;李春艳;李任峰;
单位：河南科技学院动物科技学院;动物病原与生物安全教育部重点实验室;新乡市动物检疫站;
摘要：猪流行性腹泻病毒（PEDV）是导致仔猪腹泻的主要病原之一，给养猪业造成了严重危害。本试验以PEDV N蛋白单克隆抗体（mAb）为捕获抗体，兔抗PEDV多克隆抗体（pAb）为检测抗体，建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）检测方法并确定其最佳反应条件，随后对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价，并通过对96份临床样本的检测，评价该方法与逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法的符合率。结果显示，本试验建立的PEDV DAS-ELISA检测方法的最佳反应条件为：0.478 mg/L mAb于4℃包被12 h,3%牛血清白蛋白37℃封闭60 min，待检病毒37℃孵育20 min,3.75 mg/L兔抗PEDV pAb 37℃孵育45 min,1∶5 000倍稀释的辣根过氧化酶（HRP）标记羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)37℃孵育30 min；该方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）和猪圆环病毒（PCV）均无交叉反应，具有较好的特异性；最低检测限为1.65×10~2 TCID_(50)/mL(4.7×10~(-4) mg/mL)，具有较高的敏感性；批内和批间变异系数分别为3.3%～5.9%和3.0%～6.2%，具有良好的重复性；采用DAS-ELISA和RT-PCR分别对临床样本检测，阳性符合率为91.67%(22/24)，阴性符合率为98.61%(71/72)，总符合率为96.88%(93/96)。结果表明，本试验建立的DAS-ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，适用于PEDV的临床快速检测。
关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV);;单克隆抗体(mAb);;多克隆抗体(pAb);;双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)
基金资助：河南省重点研发与推广专项（科技攻关）农业领域基金资助项目（242102111010）
