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作者：陈秋如;许慧;郝振鑫;张浩则;张超君;邢少川;马小元;胡功政;苑丽;
单位：河南农业大学动物医学院;
摘要：为探究黄芩水煎剂能否增强头孢噻呋对产超广谱β-内酰胺酶基因bla_(CTX-M)阳性大肠杆菌的抗菌活性，本试验首先分别制备携带bla_(CTX-M-55)和bla_(CTX-M-14)的重组菌（C600-1和C600-9），绘制时间-杀菌曲线评价1最小抑菌浓度（MIC）头孢噻呋和1 MIC黄芩水煎剂联用对bla_(CTX-M)阳性重组菌的体外抑杀活性；使用不加黄芩水煎剂（阴性对照）、加1/4 MIC、1/2 MIC剂量的黄芩水煎剂继代培养重组菌7 d，通过测定头孢噻呋对重组菌的MIC和重组菌的bla_(CTX-M)表达，分析黄芩水煎剂对重组菌的头孢噻呋耐药发展的干预作用；使用不加黄芩水煎剂（阴性对照）、加1/4 MIC、1/2 MIC、1 MIC剂量的黄芩水煎剂培养C600、C600-1和C600-9菌株2 h，通过荧光染色法和逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）测定细胞内、外膜通透性和外排泵活性，探索黄芩水煎剂逆转耐药性的机制。结果显示，与头孢噻呋单药相比，黄芩水煎剂与其联用后对大肠杆菌C600和重组菌C600-1、C600-9具有明显的协同抑杀活性；不同剂量黄芩水煎剂与bla_(CTX-M)阳性重组菌共培养7 d后，头孢噻呋对重组菌的MIC下降8～16倍，重组菌中bla_(CTX-M)的mRNA相对表达量均极其显著下降（P<0.001）；不同剂量黄芩水煎剂与bla_(CTX-M)阳性重组菌共培养2 h后，大肠杆菌C600和重组菌C600-1、C600-9的内、外膜通透性均极显著增加（P<0.01或P<0.001），外排泵活性均极其显著下降（P<0.001），其中在1/2 MIC和1 MIC黄芩水煎剂的共培养下，主要膜孔蛋白相关基因ompF、ompC和ompR的mRNA相对表达量均极其显著升高（P<0.001），主要外排泵相关基因arcA、acrB和tolC的mRNA相对表达量均极其显著降低（P<0.001）。结果表明，黄芩水煎剂与bla_(CTX-M)阳性重组菌共培养后，不仅能抑制重组菌的bla_(CTX-M)表达，还能明显增加细胞膜通透性并降低外排泵活性。本试验结果为我国临床从中药中挖掘超广谱β-内酰胺酶抑制剂提供了新思路。
关键词：黄芩水煎剂;;头孢噻呋;;bla_(CTX-M-55);;bla_(CTX-M-14);;大肠杆菌
基金资助：河南省高校科技创新团队支持计划项目（23IRSTHN021）;; 河南省自然科学基金重点项目（232300421111）
