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作者：袁炫帅;赵琳琳;龙淼;
单位：沈阳农业大学动物科学与医学学院重要家畜疫病研究教育部重点实验室农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(东部);
摘要：为建立一种快速检测牛轮状病毒（BRV）的方法，本试验结合重组酶介导等温扩增（RAA）技术和簇状规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白13a(CRISPR/Cas13a)系统，以BRV保守基因序列VP6设计Target RNA、RAA扩增引物和crRNA，并筛选最佳RAA引物和反应条件，建立BRV的RAA-CRISPR/Cas13a检测方法，同时验证该方法的特异性、敏感性和重复性，并与逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）方法进行临床样本检测对比。结果显示，RAA-CRISPR/Cas13a检测方法与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛冠状病毒（BCoV）、牛星状病毒（BoAstV）和大肠杆菌（Escherichia coli）未发生交叉反应，特异性强；最低检测限为1.9×10~2 copies/μL，敏感性强；组内、组间变异系数分别为3.9%和7.4%，分别小于5%和10%，重复性良好。检测108份牛粪样本，RAA-CRISPR/Cas13a与RT-qPCR检测的阳性检出率均为44%(47/108)，符合率为100%。结果表明，本试验建立的BRV RAA-CRISPR/Cas13a快速检测方法灵敏度高、特异性强，可为BRV临床快速检测提供有力技术支撑。
关键词：牛轮状病毒(BRV);;重组酶介导等温扩增(RAA);;CRISPR/Cas13a;;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR);;病毒检测
基金资助：辽宁省教育厅基本科研项目(JYTYB2024027)
