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作者：王熙涵;刘继东;曲怡;董佳梓;王建波;薛亚楠;李阳;张家豪;金璐;王天朗;王希宁;
单位：辽宁中医药大学针灸推拿学院;辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室;辽宁中医药大学实验动物医学院;
摘要：目的：观察电针“天枢”“足三里”对溃疡性结肠炎（UC）小鼠的NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)细胞焦亡信号通路的影响，探讨电针通过保护肠道屏障进而改善UC的相关机制。方法：C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、电针组、假针刺组和西药组，10只/组。采用每日3%葡聚糖硫酸钠自由饮用的方法建立UC小鼠模型，同时给予对应治疗，电针组电针双侧“天枢”“足三里”，假针刺组仅浅刺入穴位皮下不通电，西药组予美沙拉嗪溶液（33.4 g/kg）灌胃。记录小鼠体质量变化、粪便性状和便血情况并计算疾病活动指数（DAI）评分，测量结肠长度；利用小动物活体成像系统观察小鼠肠黏膜通透性FITC荧光信号强度；HE染色法观察小鼠结肠组织病理变化；TUNEL染色观察小鼠结肠组织细胞凋亡情况；ELISA法检测小鼠血清白细胞介素（IL）-18和IL-1β含量；免疫荧光法检测小鼠结肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6平均荧光强度；免疫组织化学法检测小鼠结肠组织中IL-18、IL-1β阳性表达；Western blot法检测小鼠结肠组织中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白（Occludin）、NLRP3、Caspase-1和GSDMD的蛋白相对表达量；qPCR法检测各组小鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1和GSDMD mRNA表达。结果：与正常组相比，模型组小鼠DAI评分升高（P<0.01），结肠长度缩短（P<0.01），结肠组织出现炎性浸润，绒毛和隐窝结构显著破坏，凋亡细胞数量增多（P<0.01）,TNF-α、IL-6与肠道FITC荧光强度增强（P<0.01）,IL-18、IL-1β阳性表达升高（P<0.01），结肠组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量升高（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA表达水平升高（P<0.01）,ZO-1、Occludin蛋白相对表达量降低（P<0.01），血清IL-18、IL-1β含量升高（P<0.01）。电针组和西药组与模型组相比及电针组与假针刺组比较，小鼠毛色光泽度高，活动度高，DAI评分显著降低（P<0.01），结肠长度增加（P<0.01），小鼠结肠黏膜形态相对完好，腺体排列较为有序，绒毛排列相对整齐，隐窝结构恢复较好，炎性渗出减少，凋亡细胞数量减少（P<0.01），结肠组织TNF-α、IL-6与肠道FITC荧光强度减弱（P<0.01）,IL-18、IL-1β阳性表达降低（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量降低（P<0.05,P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA表达水平降低（P<0.01）,ZO-1、Occludin蛋白相对表达量升高（P<0.05,P<0.01），血清IL-18、IL-1β含量降低（P<0.01,P<0.05）。结论：电针“天枢”“足三里”可以恢复UC小鼠结肠黏膜通透性，其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD轴抑制细胞焦亡，改善肠黏膜炎性损伤有关。
关键词：电针;;溃疡性结肠炎;;细胞焦亡;;肠道屏障
基金资助：国家自然科学基金项目（No.81603704）;; 辽宁省教育厅高等学校基本科研项目（No.LJKZ0886）;; 辽宁省科学技术计划项目（No.2021-MS-248）
