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作者：袁博;方晓苓;杨尚伟;田甜;朱玲桂;李颖;杜小正;彭晓云;姚小强;王金海;
单位：甘肃中医药大学附属医院针灸疼痛科;甘肃中医药大学针灸推拿学院;兰州大学第二医院中医科;兰州大学第二医院康复医学科;
摘要：目的：观察电头针干预对局灶性脑缺血大鼠缺血皮层区维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、辅助性T细胞（Th）17和调节性T细胞（Treg）的影响，从调控免疫细胞平衡的角度探讨电头针缓解缺血性脑卒中炎性损伤的分子机制。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电头针组、抑制剂组、激动剂组、电头针+激动剂组，每组15只。采用线栓法复制大脑中动脉栓塞大鼠模型。电头针组取双侧顶颞前斜线电针干预，每次30 min；抑制剂组给予RORγt抑制剂SR1001溶液腹腔注射；激动剂组给予RORγt激动剂SR1078溶液腹腔注射；电头针+激动剂组在腹腔注射SR1078溶液基础上再行电头针干预；所有干预均1次/d，连续7 d。干预前、后对各组大鼠行Zea-Longa评分，神经功能缺损量表（mNSS）评分和神经行为学评分。TTC染色法检测脑梗死体积；实时荧光定量PCR法检测脑缺血区皮层中RORγt mRNA的表达水平；Western blot法检测脑缺血区皮层中RORγt、白细胞介素（IL）-17A、IL-10和转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达水平；免疫组织化学法检测脑组织中IL-6、IL-21的阳性表达；免疫荧光染色法检测脑缺血区皮层中IL-17A~+Th17和叉头状转录因子P3(FOXP3)~+Treg细胞的阳性表达面积并计算其比值。结果：与假手术组比较，模型组Zea-Longa评分、mNSS评分与神经行为学评分升高（P<0.01），脑梗死体积增大（P<0.01），缺血区皮层RORγt mRNA及蛋白、IL-17A蛋白表达水平升高（P<0.01）,IL-10、TGF-β1蛋白表达水平降低（P<0.01）,IL-6、IL-21阳性表达升高（P<0.01）,IL-17A~+Th17/FOXP3~+Treg阳性表达面积比值升高（P<0.01）。与模型组比较，电头针组和抑制剂组Zea-Longa评分、mNSS评分与神经行为学评分降低（P<0.01），脑梗死体积显著缩小（P<0.01）,RORγt mRNA及蛋白、IL-17A蛋白表达水平降低（P<0.01,P<0.05）,IL-10、TGF-β1蛋白表达水平升高（P<0.05,P<0.01）,IL-6、IL-21阳性表达降低（P<0.01）,IL-17A~+Th17/FOXP3~+Treg阳性表达面积比值降低（P<0.01）；而激动剂组以上指标的结果均呈相反趋势（P<0.01,P<0.05）。与激动剂组比较，电头针+激动剂组Zea-Longa评分、mNSS评分与神经行为学评分降低（P<0.01），脑梗死体积显著缩小（P<0.05）,RORγt mRNA及蛋白、IL-17A蛋白表达水平降低（P<0.01,P<0.05）,IL-10、TGF-β1蛋白表达水平升高（P<0.01,P<0.05）,IL-6、IL-21阳性表达降低（P<0.05,P<0.01）,IL-17A~+Th17/FOXP3~+Treg阳性表达面积比值降低（P<0.01）。结论：下调ROR γt的表达，促进IL-17A~+Th17/FOXP3~+Treg比例恢复平衡可能是电头针缓解缺血性脑卒中炎性神经损伤的机制之一。
关键词：急性缺血性脑卒中;;电头针;;维甲酸相关孤儿受体γt;;辅助性T细胞;;调节性T细胞
基金资助：国家自然科学基金项目（No.81960896）;; 甘肃省科技计划项目（No.18JR2FA002）;; 甘肃中医药大学附属医院院内科研及技术创新基金青年项目（No.gzfy-2019-13）
