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作者：周宇;马怡;王治强;郭芷璇;彭清悦;苏会岚;
单位：成都医学院公共卫生学院;
摘要：结合CRISPR/Cas9与DNA Walker构建了一种检测人乳头瘤病毒（HPV16 E6 DNA）的电化学核酸传感器。通过共价键将巯基和亚甲基蓝（MB）共修饰的发夹探针HP-MB固载于电极表面；同时利用向导RNA（SgRNA）介导Cas9识别并切割HPV16 E6 DNA，切割产物（Trigger DNA）特异性打开HP-MB后，含脱氧核酶（DNAzyme）的双足DNA walker在Mg~(2+)存在下剪切HP-MB，使MB脱落。此时竞争释放的Trigger DNA能循环打开电极表面的HP-MB，且双足DNA walker可被酶切力驱动持续剪切HP-MB，导致峰电流显著降低，其下降程度与HPV16 E6 DNA浓度呈正相关。采用扫描电镜、电化学、电泳等方法对电极制备及检测过程进行表征。在最优条件下，在1 fmol/L～10 nmol/L浓度范围内，该传感器的电流变化（ΔI）与HPV16 E6 DNA浓度（c）的对数值呈良好的线性关系，检出限为0.28 fmol/L。检测临床样本的加标回收率为94.0%～104.2%，相对标准偏差为3.0%～4.1%，表明该传感器可用于临床样本的HPV DNA检测。
关键词：CRISPR/Cas9;;DNAWalker;;脱氧核酶;;电化学核酸传感器
基金资助：四川省自然科学基金项目（2024NSFSC0738）;; 成都医学院临床科学研究基金项目（2022LHFSZYB-14）;成都医学院研究生科研创新基金项目（YCX2024-01-72）资助
