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作者：酒苏婷;李慧颖;孙月婷;崔松香;徐心田;郑浩;陆为民;
单位：南京中医药大学附属医院;云南省曲靖市中医院;南京市浦口区中医院;
摘要：目的 从蛋白激酶B (AKT)/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路探究抑肝扶脾方治疗肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征（IBS-D）的可能作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为对照组，模型组，抑肝扶脾方低、中、高剂量组，匹维溴铵组，每组10只。除对照组外其余各组通过夹尾刺激21天+番泻叶灌胃14天的方法建立肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型。造模成功后抑肝扶脾方低、中、高剂量组给药量分别为0.96、1.93、3.87 g/（kg·d），匹维溴铵组给药量为13.5 mg/（kg·d），对照组及模型组予10 ml/（kg·d）蒸馏水，各组均每天灌胃1次，连续14天。实验期间记录各组大鼠一般情况，造模后及给药后比较大鼠体质量、Bristol粪便评分、腹壁撤退反射实验（AWR）评分；HE染色观察大鼠结肠组织病理形态；ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)水平；免疫荧光法检测大鼠结肠组织中AKT/mTOR通路相关蛋白[包括磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)/AKT、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）/mTOR]相对表达量；Western Blot法检测大鼠结肠组织中自噬相关蛋白[包括UNC-51样激酶（ULK1）、Beclin1 （自噬关键分子酵母Atg6同系物1）、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)]以及紧密连接蛋白[包括闭合蛋白（Occludin）、闭锁小带蛋白1 (ZO-1)]水平。结果 造模后，与对照组比较，其余各组大鼠体质量降低，粪便Bristol评分以及20、40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分均升高（P<0.05或P<0.01）。给药后，与对照组比较，模型组大鼠体质量以及结肠组织中ULK1、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Occludin、ZO-1蛋白水平均降低（P<0.05或P<0.01）；粪便Bristol评分，20、40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分，血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平，以及结肠组织中p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均升高（P<0.05或P<0.01）；病理形态结果显示，结肠组织固有层腺体上部杯状细胞明显减少，少量炎性细胞浸润；黏膜下层胶原纤维溶解，分界不清，着色变淡，微血管充血、扩张。与模型组比较，抑肝扶脾方各剂量组及匹维溴铵组大鼠体质量，以及结肠组织中Beclin1、Occludin、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平均升高（P<0.05或P<0.01）；粪便Bristol评分，40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分，血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平，以及结肠组织中p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均降低（P<0.05或P<0.01）；抑肝扶脾方各剂量组及匹维溴铵组病理形态有不同程度的改善。与匹维溴铵组比较，抑肝扶脾方低、中剂量组在20、40、60 mmHg压力级别下AWR评分均升高，抑肝扶脾方低剂量血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低，抑肝扶脾方各剂量组结肠组织中p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均升高（P<0.05）。与抑肝扶脾方低剂量组比较，抑肝扶脾方高剂量组及匹维溴铵组在各压力级别下AWR评分、结肠组织中p-AKT/AKT蛋白相对表达量降低，抑肝扶脾方中、高剂量组血清中TNF-α、IL-1β水平升高，结肠组织中p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量降低（P<0.05）。结论 抑肝扶脾方可有效改善肝郁脾虚型IBS-D模型大鼠结肠组织病理损伤，降低粪便Bristol及AWR评分，其作用机制可能与降低炎症因子水平，抑制结肠组织中AKT/mTOR通路相关蛋白，从而提高自噬相关蛋白水平有关。
关键词：腹泻型肠易激综合征;;肠黏膜屏障;;炎症因子;;蛋白激酶B;;雷帕霉素靶蛋白;;自噬;;紧密连接蛋白;;抑肝扶脾方
基金资助：国家自然科学基金（82305135）;; 国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作建设项目（国中医药人教发[2010]59号）;; 江苏省中医药管理局中医重点专科建设项目重点项目（ZD202309）;江苏省中医药管理局科技发展计划（苏中医科教[2023]18号）;; 南京中医药大学校“揭榜挂帅”重大项目（JBGS202405）
