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作者：杨豫正;姚晓玲;罗丰;马武开;
单位：贵州中医药大学;贵州中医药大学第二附属医院;
摘要：目的 运用生物信息学方法及试验验证探讨雷公藤治疗类风湿关节炎（RA）的可能作用机制。方法 通过基因表达综合数据库（GEO）、中药系统药理数据库及分析平台（TCMSP），采用基因本体论（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集、蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络、分子对接、受试者工作特征曲线（ROC）、免疫浸润分析等生物信息学分析方法对雷公藤主要成分及作用于RA的靶点进行分析预测，并对分析获得的靶基因进行实验验证。体外实验选择人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA），并以甲氨蝶呤为阳性对照，划痕实验检测培养24 h后细胞迁移率，Western Blot法检测蛋白水平、qPCR法检测靶基因mRNA水平，ELISA法检测炎症因子水平[包括白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素10 (IL-10)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)]。结果 将雷公藤有效化合物获得的117个有效靶基因与RA发病相关基因取交集，共得到55个交集基因并将其看作关键基因。对55个关键基因进行筛选，最终获得3个核心基因（即PTGS2、CXCR4、TIMP1）。根据潜在药物靶点和雷公藤主要成分的对应关系，得出雷公藤甲素和川陈皮素2个主要成分。分子对接结果显示，雷公藤甲素和川陈皮素与相应靶蛋白结合能<-5，说明其与潜在药物靶点结合强烈。体外试验结果显示，与空白对照组比较，雷公藤甲素组、川陈皮素组、阳性对照组在培养24 h后细胞迁移率均降低（P<0.01），各给药组PTGS2、CXCR4 mRNA表达及其蛋白水平均降低，TIMP1 mRNA表达及其蛋白水平均升高，IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低，IL-10水平升高（P<0.01）。与阳性对照组比较，雷公藤甲素组和川陈皮素组细胞在培养24 h后细胞迁移率升高，PTGS2、CXCR4 mRNA表达及其蛋白水平升高，TIMP1 mRNA表达及其蛋白水平降低，IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高，IL-10水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论 雷公藤的主要有效成分雷公藤甲素和川陈皮素可以抑制PTGS2、CXCR4和提高TIMP1表达，从而抑制炎症反应以达到缓解RA的作用。
关键词：类风湿关节炎;;雷公藤;;生物信息学;;雷公藤甲素;;川陈皮素
基金资助：国家自然科学基金（82274678）;; 贵州省教育厅青年科技人才成长项目（黔教技[2024]122号）;; 贵州中医药大学2024年“青年扬帆计划”（贵中医科合-QNYFZK[2024]14号）
