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作者：黄勇;李宏宇;林梦婷;王乙淋;蒙泳成;
单位：广西中医药大学/广西壮瑶药重点实验室/广西高校中药民族药资源保护与利用重点实验室;
摘要：目的：针对来源于中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor的蟾酥建立特异性PCR分子鉴定方法。方法：根据中华大蟾蜍及其混淆品线粒体中编码NADH脱氢酶2(MT-ND2)基因序列的变异位点，设计特异性鉴别引物，提取样品总DNA后建立PCR反应体系，分别对影响特异性PCR反应的主要因素如退火温度、循环次数、DNA模板量、引物量、不同聚合酶及用量、不同品牌PCR扩增仪等进行优化筛选，并对该方法进行了可行性验证。结果：当模板DNA质量符合要求时，中华大蟾蜍样品均在291 bp处有一清晰的特异性条带，而其他样品无此条带出现。结论：该研究所建立的特异性PCR方法可以有效地识别出蟾酥的基原动物中华大蟾蜍，其方法准确度高，稳定性和灵敏度良好，为蟾酥药材的物种真实性鉴定和品质评价提供了技术支持。
关键词：蟾酥;;中华大蟾蜍;;NADH脱氢酶2基因;;聚合酶链式反应;;分子鉴定
基金资助：广西自然科学基金(2020GXNSFAA238017,2023GXNSFDA026065,2019GXNSFAA245084);; 广西高校大学生创新创业训练计划项目(S202210600060,S202310600133)
