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作者：罗云梅;李铭铭;杨丹莉;李利生;
单位：遵义医科大学基础药理教育部重点实验室暨特色民族药教育部国际合作联合实验室;遵义医科大学药学院贵州省基础药理重点实验室/药理学教研室;中国药理学会贵州省药理学联合实验室;遵义医科大学第三附属医院/遵义市第一人民医院药剂科;
摘要：目的 研究淫羊藿苷（Ica）对内皮素-1(ET-1）诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的作用及其与磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt）/内皮型一氧化氮合酶（eNOS）/一氧化氮（NO）/可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）/环磷酸鸟苷（cGMP）信号通路的关系。方法 组织贴壁法培养SD大鼠原代PASMC，分为对照组，模型组，Ica低、中、高浓度（10~(-8)、10~(-7)、10~(-6) mol·L~(-1)）组，2×10~(-7) mol·L~(-1) ET-1作用2 h后加入对应浓度Ica作用48 h。为探讨Ica的抗增殖作用与PI3K/Akt/eNOS/NO/sGC/cGMP通路之间的关系，另分对照组、模型组、Ica(10~(-6) mol·L~(-1)）组、抑制剂[PI3K抑制剂LY294002(5×10~(-6) mol·L~(-1)）、eNOS抑制剂L-NAME(10~(-4)mol·L~(-1)）或sGC抑制剂NS2028(5×10~(-5) mol·L~(-1)）]组和Ica+抑制剂组。采用MTT法和BrdU荧光标记法观察Ica对ET-1诱导的PASMC增殖的影响，比色法试剂盒检测细胞培养液中NO的含量，ELISA法检测细胞培养液中cGMP的含量，Western blot法检测Akt和eNOS蛋白量及其磷酸化水平。结果 与对照组相比，模型组增殖率和吸光度值显著增加（P<0.01),p-Akt和p-eNOS蛋白表达下调（P<0.05），细胞培养上清液中NO和cGMP含量显著降低（P<0.05）。与模型组相比，Ica各浓度组增殖率和吸光度值降低（P<0.01),NO和cGMP的含量，增加p-Akt和p-eNOS蛋白表达增加（P<0.05）。与Ica组比较，Ica+LY294002组p-Akt和p-eNOS蛋白表达降低，NO和cGMP含量降低（P<0.05);Ica+L-NAME组p-e NOS蛋白表达降低，NO和cGMP含量降低（P<0.05);Ica+NS2028组cGMP含量降低（P<0.05);3组增殖率和吸光度值均显著增加（P<0.05）。结论 Ica能够通过激活PI3K/Akt/eNOS/NO/sGC/cGMP通路抑制ET-1诱导的PASMC增殖。
关键词：淫羊藿苷;;肺动脉;;平滑肌细胞;;PI3K-Akt通道;;一氧化氮;;环磷酸鸟苷
基金资助：国家自然科学基金（82260780,81260654）;; 贵州省科技计划项目（黔科合基础-ZK[2023]一般500）
