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作者:李永光;曹艳桃;
单位:定西职业技术学院;甘肃农业大学应用技术学院;
摘要:为了研究脑多头蚴(Coenurus cerebralis,Cc)硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase,TPx)的免疫原性,采集绵羊脑多头蚴原头蚴,提取总RNA;根据GenBank中亚洲牛带绦虫TaHc2-D11 mRNA序列设计特异性引物,RT-PCR扩增脑多头蚴TPx基因,构建重组质粒pMD18-T-CcTPx,鉴定后克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建的重组表达质粒pGEX-4T-1-CcTPx鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测脑多头蚴TPx重组蛋白,纯化脑多头蚴TPx重组蛋白后皮下多点注射免疫绵羊,ELISA测定其血清抗体。结果表明,脑多头蚴TPx基因序列长614 bp,含有1个591 bp的、完整的开放阅读框,脑多头蚴TPx重组蛋白分子质量为47 kD,主要以包涵体形式存在,免疫接种绵羊可刺激机体产生抗体,二免或三免后抗体水平逐步升高,抗体水平显著高于对照组同期免疫脑多头蚴原头蚴抗原的绵羊。说明脑多头蚴TPx重组蛋白具有较强的免疫原性,可作为脑多头蚴疫苗的候选抗原。
关键词:脑多头蚴;;TPx;;重组蛋白;;免疫原性;;疫苗
基金资助:甘肃农业大学科技创新基金(GAU-STS-2019-5)