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作者：刘芳芳;赵志艳;王美琳;刘佩;金聪;
单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参比实验室;传染病溯源与智能决策全国重点实验室;
摘要：目的 本研究旨在建立基于酶联免疫斑点试验（ELISPOT）的HIV感染T细胞检测方法，从细胞免疫层面辅助诊断HIV感染。方法 使用HIV感染者及健康人外周血单个核细胞（PBMC），系统确定HIV特异性ELISPOT检测方法的核心实验条件，包括：包被抗体与检测抗体的浓度，刺激肽组成与合适浓度，细胞浓度，培养基中白细胞介素-2(IL-2)浓度，并评估细胞样本中去除死细胞对ELISPOT检测结果的影响。将建立的检测方法应用于健康人和HIV感染者样本。结果 确定HIV ELISPOT免疫检测方法的最佳条件为：5μg/mL的包被抗体浓度，2μg/mL的检测抗体浓度；刺激肽混合使用终浓度为5μg/mL的Gag、Pol、Env、Nef蛋白表位肽；细胞浓度为2×10~5 PBMCs/孔；培养基IL-2浓度为20 U/mL。去除死细胞能够提高细胞活率，提高ELISPOT检测斑点数。将检测条件优化后的方法应用于37例HIV感染者和40例健康人，结果与预期相符，检测灵敏度和特异性均达到100%。结论 成功建立HIV ELISPOT检测方法，该方法可区分健康人与HIV感染者，弥补目前HIV感染检测缺乏细胞免疫检测方法的不足，为HIV感染的辅助诊断提供新的检测工具。
关键词：艾滋病病毒;;酶联免疫斑点试验;;细胞免疫;;辅助诊断
基金资助：国家重点研发计划项目（2024YFC2309503）;; 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室项目;; 北京市自然科学基金-昌平创新联合基金资助项目（L234054）~~
