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作者：沈悦;郑红;范新炯;
单位：安徽医科大学基础医学院干细胞与组织研究中心;
摘要：目的 探究提升羰基还原酶ChKRED20可溶性的方法并测定其酶学性质。方法 合成ChKRED20基因并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行异源表达，通过增减和改变His-tag位置、改变发酵条件等研究蛋白可溶性，并进一步优化诱导时间、温度及异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度等以提升重组蛋白的表达，随后研究重组酶的酶学性质。结果 利用ChKRED20原核表达菌株，在大肠埃希菌表达体系内去除His-tag并进行发酵条件优化，以获得最优可溶蛋白表达；无His-tag ChKRED20比携带N端和C端His-tag的蛋白酶活性分别提高了0.77和1.28倍；最适温度为55℃,最适pH为8.0;且该酶在较高温度下、碱性环境中仍具有较好的适应性。结论 去除His-tag及优化发酵条件可以大大提升ChKRED20在大肠埃希菌中的可溶性。
关键词：羰基还原酶;;ChKRED20;;His-tag;;酶学性质;;大肠埃希菌;;蛋白可溶性
基金资助：国家自然科学基金项目(编号：82173725、31400680);; 高校中青年教师培养行动项目(编号：DTR2024005)~~
