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作者：任俏慧;朱欣悦;吕伟;臧艳;王莲子;周心怡;姚骏骁;李涛;
单位：安徽医科大学第一附属医院检验科;
摘要：目的 研究伊利司莫-铜离子(ES+Cu~(2+))对人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7的增殖抑制作用及其诱导铜死亡的潜力。方法 体外培养人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7细胞，分别施以ES溶液、Cu~(2+)溶液和铜螯合剂四硫代钼酸铵(ATTM)溶液的单独或联合处理。采用CCK-8试剂盒评估ES+Cu~(2+)对人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7细胞存活率的影响，以及铜螯合剂ATTM预处理后ES+Cu~(2+)对细胞存活率的作用。流式细胞术检测ES+Cu~(2+)诱导的细胞死亡情况及经铜螯合剂ATTM预处理后ES+Cu~(2+)诱导细胞死亡的变化。Western blot检测ES+Cu~(2+)诱导后细胞铜死亡相关蛋白ATP酶铜转运β(ATP7B)、铁氧还蛋白1(FDX1)、二氢硫辛酰胺S-乙酰转移酶(DLAT)、超氧化物歧化酶1(SOD1)的表达情况及经铜螯合剂ATTM预处理后ES+Cu~(2+)对铜死亡相关蛋白表达的影响。细胞划痕实验检测ES+Cu~(2+)对细胞增殖能力的影响及ATTM预处理后的逆转效应。结果 ES+Cu~(2+)对人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7的毒性呈现显著的剂量依赖性(P<0.05)。ES和Cu~(2+)联合应用相较于单独使用ES或者Cu~(2+)对肝癌细胞的抑制效果更为显著(P<0.05),而铜螯合剂ATTM能够逆转ES+Cu~(2+)对细胞增殖的抑制效应(P<0.05)。流式结果显示，与对照组相比，ES+Cu~(2+)处理后加重人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7的细胞毒活性，而ATTM干预后较ES+Cu~(2+)处理组细胞的毒活性减轻(P<0.05)。细胞划痕实验结果表明，ES+Cu~(2+)处理后PLC/PRF/5和Huh-7细胞的迁移能力降低，而ATTM的加入逆转了ES+Cu~(2+)对细胞迁移的抑制作用(P<0.05)。与对照组相比，ES+Cu~(2+)处理后铜死亡相关蛋白ATP7B、FDX1、DLAT和SOD1的表达水平均有所下降，而ATTM的加入逆转了这些蛋白表达的变化趋势(P<0.05)。结论 ES与Cu~(2+)的联合应用能够有效抑制肝癌细胞PLC/PRF/5和Huh-7的增殖和迁移能力，并诱导铜死亡，为肝细胞癌的治疗提供了新的策略。
关键词：伊利司莫-铜离子;;肝细胞癌;;铜死亡;;增殖;;迁移
基金资助：安徽医科大学“抗炎免疫药物教育部重点实验室”开放研究基金重点项目(编号：KFJJ-2021-04);安徽医科大学横向课题经费资助项目(编号：K2023009);; 安徽省学术和技术带头人及后备人选科研活动经费资助项目(编号：2022H291);; 安徽省转化医学研究院科研基金项目(编号：2023zhyx-C24)~~
