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作者：范成意;姜鸿彦;王波;
单位：海南医科大学附属海南医院/海南省人民医院;重庆三峡医药高等专科学校;
摘要：目的 应用生物信息学方法对人胃内因子进行理化性质分析，并对该蛋白进行真核表达与纯化。方法 利用蛋白质在线分析软件预测胃内因子理化性质并分析其亲水性和疏水性；利用在线工具预测分析人胃内因子信号肽及其亚细胞定位。构建真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-human GIF-His tag,在HEK293F细胞表达后经镍柱纯化获得胃内因子；采用SDS-PAGE、Western blot与间接ELISA分别验证纯化的胃内因子纯度及活性。结果 胃内因子含有417个氨基酸，是亲水性酸性稳定蛋白，属于分泌蛋白且具有Sec原始信号肽；成功构建pcDNA3.1(+)-human GIF-His tag重组质粒，并在HEK293F细胞表达系统中获得可溶性表达。结论 成功制得真核来源的人胃内因子，生物信息学结果显示该蛋白为亲水酸性稳定分泌蛋白，为后续使用该蛋白作为免疫原及蛋白校准品以构建胃内因子免疫检测方法奠定了基础。
关键词：胃内因子;;真核表达;;生物信息学;;蛋白纯化;;活性鉴定;;ELISA
基金资助：海南省重大科技计划项目(编号：ZDKJ2021040)~~
