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作者：李建柱;赵利琴;王露遥;师睦然;王成才;张梦圆;马超锋;焦凤超;何书海;
单位：信阳农林学院动物科技学院;河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心;信阳市畜牧兽医技术服务中心;
摘要：为建立鸭星状病毒2型(DAstV-2)核酸现场快速检测方法，基于CRISPR/Casl2a切割原理，联合重组酶聚合酶等温扩增(recombinase ploymerase amplification, RPA),设计用于DAstV-2核酸RPA扩增的引物和基于CRISPR/Cas12a反应的向导RNA(crRNA),优化反应条件确立最佳检测体系，并用胶体金横向流动试纸条(lateral flow dipstick, LFD)报告检测结果。结果：该检测体系对DAstV-2重组质粒的检出下限为10 copies/μL,灵敏性强且重复性好；用此检测体系检测鸭常见病毒，除DAstV-2核酸阳性外，其他均为阴性，特异性强；与普通RT-PCR的检测结果相比较，符合率达到100%,且更加方便快捷。研究结果提示，基于RPA-CRISPR/Cas12a-LFD系统的DAstV-2核酸检测方法灵敏性好、特异性强、操作简单，可在37℃恒温下实现DAstV-2的现场快速可视化检测。
关键词：鸭星状病毒2型;;重组酶聚合酶扩增;;CRISPR/Cas12a;;横向流动试纸条
基金资助：2023年度河南省重点研发与推广专项(科技攻关)(232102111043);; 信阳农林学院家禽重大疫病防控科技创新团队项目(2022CXTD06)
