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作者：卢洪婷;朱雪蛟;周金柱;张雪寒;陶然;郭容利;牛家强;李彬;
单位：西藏农牧大学动物科学学院/农业农村部西藏包虫病防治重点实验室/西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室;江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室;
摘要：旨在对猪源泛素样蛋白负调控因子1(NUB1)进行鉴定、表达和细胞定位分析，并探究NUB1对猪轮状病毒(PoRV)的复制、先天性免疫、神经前体细胞表达发育调控下调蛋白8(NEDD8)通路调节的影响。设计带有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物并在C端带入His标签，以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的cDNA为模板，扩增NUB1基因，并克隆到pcDNA3.1(+)载体；利用Lipofectamine~(TM)3000脂质体转染重组质粒到MARC145细胞，Western blot和间接免疫荧光试验检测NUB1在MARC145细胞中的表达情况，共聚焦显微分析技术确定NUB1定位情况。结果：成功扩增出猪源NUB1基因，并构建NUB1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NUB1-His;重组质粒能在MARC145细胞中表达，NUB1蛋白定位于细胞核和细胞浆。综上，本试验成功构建了可外源表达NUB1的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NUB1-His,为后续研究NUB1的生物学功能及其对PoRV复制的影响奠定了基础。
关键词：NUB1;;NEDD8;;基因克隆;;细胞定位;;基因表达
基金资助：国家重点研发计划项目(2023YFD1801303);; 国家自然科学基金项目(32302892);; 江苏省自然科学基金项目(BK20221432)
