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作者：郭雨林;高明;陈欢;李慧;田迅;赵源;徐刚;温军玲;李少雄;
单位：上海中医药大学针灸推拿学院;上海中医药大学科技实验中心;
摘要：目的：基于PTEN诱导假定激酶1(PINK1)/帕金蛋白（Parkin）通路观察针刺预处理对运动性骨骼肌损伤（EIMD）大鼠腓肠肌组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响，探讨针刺预处理防治EIMD的可能机制。方法：88只6周龄雄性SD大鼠，随机取8只大鼠作为空白组，剩余80只大鼠随机分为模型组、针刺预处理组，每组40只。模型组、针刺预处理组又按照造模后进行取材的时间点0 h、12 h、24 h、48 h、72 h，随机分为5个亚组，每组8只。模型组和针刺预处理组大鼠采用动物实验跑台进行一次间歇性下坡跑离心运动，建立EIMD模型。针刺预处理组大鼠于模型制备前给予针刺“关元”、双侧“足三里”穴，每天1次，每次20 min，连续7 d。采用透射电镜观察各组大鼠腓肠肌组织超微结构；ELISA法检测大鼠血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）含量；Western blot法检测大鼠腓肠肌组织PINK1、Parkin、螯合体1(p62)和微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的蛋白表达；实时荧光定量PCR法检测大鼠腓肠肌组织PINK1、Parkin、p62、LC3B的mRNA表达。结果：与空白组比较，0 h、12 h、24 h、48 h各模型亚组大鼠腓肠肌线粒体出现明显肿胀，12 h、24 h各模型亚组有自噬体形成，72 h模型亚组线粒体形态逐渐恢复正常；5个模型亚组大鼠血清MDA含量升高（P<0.01,P<0.05）;0 h、12 h、24 h、48 h各模型亚组SOD、CAT含量降低（P<0.05,P<0.01）;0 h、12 h、24 h各模型亚组大鼠腓肠肌组织PINK1、Parkin、LC3B蛋白及m RNA表达升高（P<0.01）;0 h、12 h、24 h、48 h各模型亚组p62蛋白及m RNA表达降低（P<0.01,P<0.05）。与模型组同时间点亚组比较，各针刺预处理亚组大鼠肌原纤维损伤较轻，线粒体肿胀程度较轻，自噬体数量较少；0 h、12 h、24 h、48 h各针刺预处理亚组MDA含量降低（P<0.05,P<0.01）;12 h针刺预处理亚组SOD、CAT含量升高（P<0.05,P<0.01）;0 h、12 h、24 h各针刺预处理亚组PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达降低（P<0.01,P<0.05）;12 h针刺预处理亚组LC3B蛋白及mRNA表达降低（P<0.01）;0 h、24 h各针刺预处理亚组p62蛋白及mRNA表达升高（P<0.01,P<0.05）。结论：一次间歇性下坡跑离心运动可诱导线粒体自噬过度激活，针刺预处理可以改善EIMD，其作用机制可能与调控PINK1/Parkin信号通路表达，减少骨骼肌细胞氧化应激损伤，抑制线粒体自噬过度激活有关。
关键词：运动性骨骼肌损伤;;针刺预处理;;氧化应激;;线粒体自噬;;PINK1/Parkin通路
基金资助：国家自然科学基金资助项目：82074550;; 国家重点研发计划中医药现代化重点资助项目：2018YFC1707801
