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作者：张纯;张书萌;毛妍;陈杏;匡慧芳;杨怡;陈伶利;李杰;
单位：湖南中医药大学;
摘要：目的 基于DNA甲基化探讨养心通脉方治疗冠心病血瘀证的作用机制。方法 将72只SD大鼠随机分为对照组12只和造模组60只，造模组大鼠采用高脂饲料喂养+维生素D3灌胃+异丙肾上腺素皮下注射法构建冠心病血瘀证大鼠模型。将造模成功的41只大鼠随机分为模型组、养心通脉方低、中、高剂量组和阿托伐他汀钙组，每组8只，1只留作备用。养心通脉方低、中、高剂量组分别予养心通脉方6、12、18 g/（kg·d）灌胃，阿托伐他汀钙组予阿托伐他汀钙片1.8 mg/（kg·d）灌胃，对照组和模型组予0.9%氯化钠注射液4 ml/（kg·d）灌胃，每日1次，连续灌胃3周。末次给药24 h后，ELISA法检测血清血脂[总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）]、心肌酶[心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶（LDH）]、炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)]水平，HE染色观察心肌组织病理改变。全血DNA甲基化测序分析对照组、模型组和养心通脉方高剂量组差异甲基化基因表达，并对筛选到的关键基因采用Western Blot法进行下游信号通路的蛋白水平验证。结果 与对照组比较，模型组大鼠TC、TG、LDL-C、cTnT、CK-MB、LDH、IL-1β水平升高，HDL-C、IL-10水平降低（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较，各给药组TC、LDL-C、CK-MB、LDH水平降低，IL-10水平升高，其中养心通脉方高剂量组在降低cTnT水平方面优于其他中药组（P<0.05或P<0.01）。HE病理染色表明养心通脉方高剂量组可改善心肌细胞肿胀、排列紊乱和胞核固缩、消失等情况，减轻心肌细胞损伤。全血DNA甲基化测序结果表明，对照组、模型组和养心通脉方高剂量组共有差异甲基化表达基因240个，其中高甲基化表达109个，低甲基化表达131个，真核翻译始动因子2α激酶3(eif2ak3)为关键差异甲基化表达基因。与对照组比较，模型组EIF2AK3、磷酸化蛋白激酶RNA样内质网激酶（p-PERK）、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白（CHOP）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白水平升高、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平降低（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，养心通脉方高剂量组EIF2AK3、p-PERK、ATF4、CHOP、Bax蛋白水平降低、Bcl-2蛋白水平升高（P<0.05或P<0.01）。结论 养心通脉方可能通过调控关键差异甲基化表达基因eif2ak3及PERK/ATF4/CHOP信号通路，从而抑制内质网应激，减少心肌细胞凋亡，达到治疗冠心病血瘀证的作用。
关键词：冠心病;;血瘀证;;真核翻译始动因子2α激酶3;;蛋白激酶RNA样内质网激酶;;活化转录因子4;;C/EBP同源蛋白;;养心通脉方
基金资助：国家自然科学基金（81874375）;; 湖南省自然科学基金青年项目（2025JJ60521）;; 湖南省研究生科研创新项目（CX20251195）;; 湖南中医药大学研究生科研创新项目（2025CX162）;; 湖南省普通高等学校科技创新团队（湘教通[2023]233号）
