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作者：方志远;宋伟;张育民;刘瑞;张艳宁;王成伟;李坤;王亚康;
单位：西安交通大学医学院附属红会医院关节病医院髋关节病区;新疆医科大学第六附属医院骨科;新疆医科大学;
摘要：目的：探讨去铁胺（DFO）通过抑制巨噬细胞内铁过载治疗血友病性滑膜炎的作用机制。方法：体外培养RAW264.7巨噬细胞，分为对照组、铁剂组及DFO低、中、高剂量组。30只8周龄雄性C57BL/6大鼠成功构建血友病性关节病动物模型，按照随机数字表法分为对照组、铁剂组及DFO低、中、高剂量组，于25周龄时取膝关节滑膜组织制备4μm切片。采用普鲁士蓝染色法检测巨噬细胞及大鼠膝关节滑膜组织铁沉积情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测mRNA相对表达量，采用蛋白质印迹法检测蛋白表达，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平，采用苏木精-伊红及番红O-固绿染色检测滑膜组织血管增生情况，采用免疫组化检测巨噬细胞极化相关蛋白表达。结果：DFO干预24、48 h后，铁剂组巨噬细胞胞质内蓝染面积均大于同时间其余各组（P均<0.001）。DFO干预48 h后，铁剂组巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA相对表达量及iNOS蛋白水平均高于同时间其余各组和DFO干预24 h后的铁剂组（P均<0.001）。DFO干预48 h后，铁剂组培养基上清中TNF-α及IL-6水平高于同时间其余各组和DFO干预24 h后的铁剂组（P均<0.001）。DFO干预48 h后，铁剂组巨噬细胞磷酸化真核翻译起始因子4E结合蛋白1(p-4E-BP1)水平高于同时间其余各组和DFO干预24 h后的铁剂组（P均<0.001）。铁剂组大鼠左膝关节滑膜组织蓝染面积最大（P均<0.001）,DFO低、中、高剂量组大鼠左膝关节滑膜组织蓝染面积随着DFO浓度的增高而降低，呈浓度依赖性（P均<0.001）。随着铁沉积的减少，各组大鼠左膝关节滑膜组织内血管和梭形炎症细胞的数量也减少。铁剂组及DFO低、中、高剂量组大鼠左膝关节滑膜组织内F4/80蛋白水平均高于对照组大鼠（P均<0.001）。铁剂组大鼠左膝关节滑膜组织iNOS蛋白水平最高，与其余各组比较差异均有统计学意义（P均<0.001）,DFO低、中、高剂量组大鼠左膝关节滑膜组织iNOS蛋白水平随着DFO浓度的增高而降低，呈浓度依赖性（P均<0.001）。铁剂组大鼠左膝关节滑膜组织内p-4E-BP1蛋白水平最高（P均<0.001）,DFO低、中、高剂量组大鼠左膝关节滑膜组织内p-4E-BP1蛋白水平随着DFO浓度的增高而降低，呈浓度依赖性（P均<0.05）。结论：DFO通过清除滑膜组织中的铁离子，抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)通路4E-BP1磷酸化，阻断巨噬细胞M1极化，从而缓解铁过载性滑膜炎。
关键词：去铁胺;;血友病性滑膜炎;;铁过载;;巨噬细胞;;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1通路
基金资助：国家自然科学基金委员会地区项目（81860164）;; 新疆维吾尔自治区自然科学基金（2017D01c267）
