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作者：陈佳薇;庞洪泽;雷白时;赵款;张云航;包银莉;蒋文明;张武超;袁万哲;
单位：河北农业大学动物医学院;国家兽用生物制品工程技术研究中心;动物源性人兽共患病防控福建省高校工程研究中心,龙岩学院生命科学学院;中国动物卫生与流行病学中心;
摘要：为获得鸽Ⅰ型副黏病毒（PPMV-1）流行基因型候选疫苗株，基于反向遗传学技术致弱PPMV-1QY株。首先，通过选择特异的酶切位点将PPMV-1 QY株全长基因组分为5段（A～E），在基因组5′端插入T7启动子序列，3′端插入具有自我剪切功能的丁肝核酶序列和T7终止子序列，同时将F蛋白裂解位点序列突变为La Sota株的F蛋白裂解位点序列，将获得的基因片段依次克隆至改造后的pOK-12X载体，获得包含QY株全长基因组的质粒，命名为pOK-aQY；其次，将NP、P和L基因分别克隆至pCI-neo载体，获得辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L，并通过微基因组系统验证其生物学功能；最后，将上述质粒pOK-aQY、pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染至BSR-T7/5细胞拯救病毒，通过间接免疫荧光（IFA）和遗传标记测序鉴定拯救病毒，并评价其稳定性和生物学特性。结果显示，成功构建了pOK-aQY、pCI-NP、pCI-P和pCI-L质粒；IFA及序列鉴定结果证明重组病毒aQY株拯救成功，且aQY株具有良好稳定性，MDT为108 h,ICPI为0。综上所述，利用反向遗传学技术成功致弱QY株，且该毒株稳定性良好，为研究PPMV-1流行毒株的基因组特性与研发基因型匹配的疫苗奠定了基础。
关键词：鸽Ⅰ型副黏病毒;;反向遗传学;;病毒拯救;;生物学特性;;疫苗候选株
基金资助：“十四五”国家重点研发计划项目（2023YFD1802602）;; 预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室开放基金项目（2021KF03）
