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作者：张亮;张越;安芳兰;杨进才;
单位：中农威特生物科技股份有限公司;中国农业科学院兰州兽医研究所;
摘要：旨在利用大肠杆菌表达系统制备非洲猪瘟病毒（ASFV）囊膜蛋白pE199L，并评估其免疫原性。将优化后的p E199L蛋白的基因克隆至pET-32a载体，重组质粒经大肠杆菌诱导表达后通过亲和层析纯化，并进行Western-blot鉴定其特异性。将纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体，通过间接ELISA和细胞间接免疫荧光分别检测血清抗体效价及特异性，最后通过ASFV复制抑制试验测定免疫血清的抗病毒活性。结果显示，成功制备了ASFV pE199L蛋白，免疫小鼠后第28天血清抗体效价达1∶128 000，该血清可与感染ASFV的猪骨髓巨噬细胞发生特异性免疫结合。流式细胞术检测表明，免疫后小鼠脾CD4~+和CD8~+T淋巴细胞显著活化，血清中IFN-γ和IL-4细胞因子的含量均显著上升。病毒复制抑制试验显示，pE199L蛋白诱导的抗体可有效抑制ASFV复制。综上所述，pE199L蛋白具有良好免疫原性，为ASFV亚单位疫苗研发提供了重要候选抗原。
关键词：非洲猪瘟;;pE199L蛋白;;原核表达;;免疫原性
基金资助：非洲猪瘟亚单位疫苗产业化生产技术体系创建与推广应用项目（23ZDKA0002）;; 甘肃省自然科学基金重点项目（23YFNA0011）;; 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（CAAS-ZDRW202409）;; 甘肃省科技重大专项（23ZDNA007）
