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作者：王智乐;袁佳欣;卢佳慧;吕文杰;李欣蕊;张瑞华;李龙飞;徐彤;
单位：河北北方学院预防兽医学重点实验室;
摘要：为了研制有效递送H9N2禽流感HA抗原的口服黏膜疫苗，本研究将M细胞配体OmpH与H9N2禽流感病毒血凝素基因HA1相连接，扩增了HA1-OmpH片段，该片段克隆至乳酸菌表达载体pMG36e，电转化乳酸乳球菌MG1363，构建了能够融合表达H9N2 HA1和OmpH的重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1-OmpH。利用SDS-PAGE证实目的蛋白HA1-OmpH获得了表达，Western blot证实表达的目的蛋白具有免疫反应性。以此重组菌口服免疫1日龄雏鸡，每只鸡口服2×10~9 CFU菌液，免疫2次，免疫间隔10 d，每次连续免疫3 d。在第2次免疫后第10天采集血清与气管灌洗液，并利用ELISA和HI检测其抗体与细胞因子水平。结果显示，本研究构建的重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1-OmpH口服黏膜疫苗血凝效价明显高于空白对照组，也显著高于MG1363-pMG36e-HA1对照组。同时血清抗体IgY、sIgA水平显著高于空白对照组，也显著高于MG1363-pMG36e-HA1对照组。此外，与空白对照组和MG1363-pMG36e-HA1对照组相比，该MG1363-pMG36e-HA1-OmpH口服黏膜疫苗能显著提高雏鸡气管灌洗液中细胞因子水平。免疫结束10 d后进行攻毒试验，MG1363-pMG36e-HA1-OmpH显著缓减攻毒鸡的临床症状，抑制肺脏组织病理学损伤和炎症反应，降低肺组织的病毒滴度。结果证实M细胞配体OmpH能够将HA1蛋白靶向于M细胞，促进抗原的吸收，增强口服疫苗的免疫效果。
关键词：H9N2禽流感病毒;;M细胞配体;;OmpH;;乳酸乳球菌
基金资助：河北省自然科学基金（C2022405010）;; 河北省高等学校科学技术研究项目（ZD2020314）;; 河北省科技厅重点研发计划（20326624D）;; 河北省第三期现代农业产业技术体系蛋鸡肉鸡（家禽）创新团队建设专项（HBCT2023210208）
