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作者:邓小莺;王俊娜;马翮斯;虞凌雪;李国新;
单位:中国农业科学院上海兽医研究所;
摘要:猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪病毒性腹泻的重要病原,在世界范围内广泛流行,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。PEDV S蛋白含丰富的抗原表位,能够诱导机体产生针对PEDV的中和抗体,被认为是研制PEDV亚单位疫苗的主要靶标抗原。构建稳定表达PEDV S蛋白的细胞系,可为抗PEDV基因工程疫苗及S蛋白功能研究奠定基础。本研究构建了包含S蛋白全长基因的质粒pCDNA5/FRT-S和包含S蛋白胞外结构域的质粒(去除跨膜结构域和胞内区)pCDNA5/FRT-S(-Tm),把两种质粒分别转染CHO细胞,经抗性筛选获得了稳定表达目标蛋白的Flp-In~(TM) CHO细胞系。IFA结果显示,两种重组细胞系传代至第10代仍能稳定表达目的蛋白。这些细胞系的建立为研制抗PEDV新型亚单位疫苗奠定了良好的基础。
关键词:猪流行性腹泻病毒;;S蛋白;;CHO细胞系;;稳定表达
基金资助:上海市科技兴农技术创新项目(X2023-02-08-00-12-F04612);; 国家重点研发计划项目(2022YFD1800800)