来源：期刊VIP网 时间：
作者：于浩洋;王彩霞;吴绍强;仇松寅;刘晓飞;冯春燕;林祥梅;
单位：中国质量检验检测科学研究院动物检验与检疫研究所;
摘要：旨在建立永生化羔羊睾丸细胞（lamb testis,LT），为山羊痘病毒（Goat pox virus,GTPV）疫苗等的疫苗研发及分子生物学研究提供有力的工具。研究采用酶消化法分离原代LT细胞，利用慢病毒载体分别包装含有hTERT和SV40-LT基因的两种重组慢病毒，进一步共同感染原代LT细胞，经嘌呤霉素加压筛选，将hTERT和SV40-LT基因整合到原代LT细胞的染色体中，筛选并获得稳定传代的LT细胞。提取上述细胞的DNA和RNA，利用荧光PCR与IFA分别在基因水平与蛋白水平检测hTERT与SV40-LT的表达，鉴定为阳性的亚克隆即为永生化羔羊睾丸细胞（immortalized lamb testis,ILT）。检测ILT的细胞生长曲线、细胞存活率，传代稳定性等特性，进一步检测ILT细胞对GTPV的生长特性并与其在Vero细胞的生长特性进行比较。结果表明，本研究利用慢病毒载体将hTERT和SV40-LT基因成功转入原代LT细胞中，成功建立了稳定表达SV40-LT基因与hTERT基因的ILT细胞；传代试验表明ILT细胞至少可以稳定传40代；ILT细胞与原代LT细胞形态一致，细胞的生长速度比原代LT细胞速度快；GTPV能够很好地在ILT细胞中繁殖，在病毒感染后第5天，TCID_(50)达到10~(5.4) TCID_(50)/mL，比在Vero细胞中的生长速度快。该研究成功为GTPV的疫苗生产及后续病毒的分子生物学研究提供了重要的试验材料。
关键词：SV40-LT;;hTERT;;羔羊睾丸细胞;;山羊痘病毒;;永生化细胞
基金资助：十四五国家重点研发计划项目（2022YFD1800500）
