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作者：刘夏飞;任伟宏;李杉;余俊杰;朱武洋;段招军;
单位：河南中医药大学第一临床医学院;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;河南中医药大学第一附属医院;甘肃中医药大学公共卫生学院;
摘要：2019年12月以来，严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)席卷全球，但在控制SARS-CoV-2大流行的综合策略中一直空缺3岁以下儿童的免疫接种。兰州羔羊株轮状病毒（Lanzhou lamb rotavirus,LLR）是我国获批上市用于预防婴幼儿轮状病毒胃肠炎的常规减毒活疫苗，本研究利用反向遗传学技术将SARS-CoV-2的受体结合结构域（Receptor-binding domain,RBD）蛋白插入LLR/NSP3基因的ORF后进行重组病毒拯救，通过结合致细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）、dsRNA PAGE硝酸银染色和NSP3基因RT-PCR扩增证明我们成功拯救出rLLR/NSP3-CoV-2/RBD重组病毒，且重组病毒的NSP3基因在P5代以内出现了与预期相符的条带迁移。本研究进一步通过Western blot和间接免疫荧光证明rLLR/NSP3-CoV-2/RBD重组病毒可以在P5代以内稳定表达SARS-CoV-2 RBD蛋白。间接免疫荧光和qRT-PCR扩增的结果显示虽然rLLR/NSP3-CoV-2/RBD的滴度和在不同时间点的基因组拷贝数略低于亲本株rLLR，但不影响病毒的感染和复制。本研究通过反向遗传学技术成功拯救出能在P5代以内稳定表达SARS-CoV-2 RBD蛋白的rLLR/NSP3-CoV-2/RBD重组病毒，为进一步探索开发适合3岁以下儿童使用的口服轮状病毒和SARS-CoV-2联合疫苗提供了思路。
关键词：新冠病毒;受体结合结构域;兰州羔羊株轮状病毒;反向遗传学;重组病毒
基金资助：国家资助博士后研究人员计划B档资助（项目号：GZB:20240207）,题目：G9P[8]型轮状病毒感染性克隆的建立及细胞适应性的分子机制~~
