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作者：易玮婕;李嘉豪;赵伊然;单衍可;刘斐;
单位：南京农业大学动物医学院单分子纳米实验室;江苏省农业科学院兽医研究所;
摘要：本文旨在建立一种基于重组酶介导等温扩增技术（Recombinase aided amplification, RAA）结合核酸试纸条的猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）可视化检测方法，以应用于养殖场内部实现现场快速检测。选择PEDV N基因保守序列为模板，设计特异性引物及荧光探针，对引物进行对比筛选，对反应条件、引物浓度、探针浓度进行优化，并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。将建立的检测方法应用于临床样品，并与荧光定量PCR方法进行比较。结果表明：建立的方法在38℃恒温10 min扩增反应以及5 min侧流向层析后，即可完成检测，与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪德尔塔冠状病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒均无交叉反应，最低检测限可达101拷贝/μL。应用该方法检测20份阴性和20份阳性，共40份临床样本，检测结果与荧光定量PCR方法保持一致。本研究建立的RAA结合核酸试纸条的方法具有特异性好、灵敏度高、耗时短、仪器设备简便等优点，适用于基层现场快速检测。
关键词：猪流行性腹泻病毒;重组酶介导等温核酸扩增技术;现场快速检测
基金资助：湖南省重点研发项目（项目号：2023NK2017）,题目：畜禽疫病诊断及疫苗免疫评价技术研究与示范
