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作者：张晓凤;高志峰;王紫研;夏伯阳;马鸣潇;费东亮;
单位：锦州医科大学畜牧兽医学院;辽宁省农业发展服务中心;
摘要：猴痘病毒（Monkeypox virus,MPXV）是一种能够感染人和动物的痘病毒，已对人类公共卫生安全构成巨大威胁，安全高效的疫苗能够有效预防和控制病毒的传播。本研究选取MPXV A29L、A35R和M1R氨基酸序列通过柔性Linker(GGGGS)连接设计融合蛋白，并根据大肠杆菌密码子偏嗜性对其密码子优化后合成全基因，插入pET-28a载体，构建pET28a-A29L-A35R-M1R重组质粒。转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达，经SDSPAGE和Western blot进行鉴定，并确定最佳诱导条件。在此基础上，对融合蛋白rA29L-A35R-M1R进行Ni-NTA亲和层析柱纯化后，免疫小鼠。通过ELISA方法检测抗MPXV A29L、A35R和M1R特异性IgG和细胞因子（IFN-γ、IL-2和IL-4）水平，评价融合蛋白免疫原性。实验结果显示：重组质粒pET-28a-A29L-A35R-M1R在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中成功表达，最佳表达条件为37℃、0.25 mmol/L IPTG诱导5 h；将纯化的融合蛋白rA29LA35R-M1R免疫小鼠3次后，能够产生抗A29L、A35R和M1R特异性IgG，其中anti-rA29L-A35R-M1R IgG水平最高，且融合蛋白rA29L-A35R-M1R能够刺激机体产生高水平IFN-γ,IL-2和IL-4，与对照组差异均具有统计学意义（P<0.01）。由此表明，融合蛋白rA29L-A35R-M1R具有良好的免疫原性。为猴痘病毒新型疫苗和治疗性生物制剂的研发提供理论依据。
关键词：猴痘病毒;融合蛋白;原核表达;免疫原性
基金资助：国家重点研发计划（项目号：2023YFD1800404）,题目：猴痘候选疫苗、抗体研制~~
